[发明专利]利用液相色谱-串联质谱联用技术定量分析伏罗尼布及其代谢产物X297的方法

权利要求书

1.一种利用高效液相色谱-串联质谱联用装置同时定量分析伏罗尼布及其代谢产物X297的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)制备含有伏罗尼布和X297的样品溶液；

2)将所述样品溶液注入到高效液相色谱-串联质谱联用装置中，获得质量色谱图；

3)根据所述质量色谱图使用内标法对伏罗尼布和X297进行定量分析，

其中，所述高效液相色谱中使用由流动相A和流动相B组成的混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为含0.05质量％至0.25质量％甲酸的水溶液，优选为含0.10质量％甲酸的水溶液，所述流动相B为含0.10质量％至0.30质量％甲酸的乙腈，优选为含0.15质量％甲酸的乙腈。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述梯度洗脱程序的总时长不超过15分钟，优选不超过10分钟，更优选不超过4分钟，并且在所述梯度洗脱程序中，起始流动相和最终流动相均为70体积％流动相A+30体积％流动相B，流动相B的浓度梯度从30体积％变化至70体积％所用的时间为0.5至1min。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述梯度洗脱程序为：

0.00至2.00min，30体积％至70体积％流动相B；

2.00至3.50min，70体积％至90体积％流动相B；

3.50至4.00min，90体积％至30体积％流动相B，

其中流动相A和流动相B的总量为100体积％。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述梯度洗脱程序为：

0.00至1.00min,30体积％至30体积％流动相B；

1.00至1.51min,30体积％至70体积％流动相B；

1.51至2.00min,70体积％至70体积％流动相B；

2.00至2.01min,70体积％至90体积％流动相B；

2.01至3.50min,90体积％至90体积％流动相B；

3.50至3.51min,90体积％至30体积％流动相B；

3.51至4.00min,30体积％至30体积％流动相B；

其中流动相A和流动相B的总量为100体积％。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述高效液相色谱中的色谱柱为反相色谱柱，优选以十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述制备含有伏罗尼布和X297的样品溶液包括：用二甲基亚砜溶解伏罗尼布和X297，然后用由乙腈和水组成的稀释液将溶液稀释。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述伏罗尼布和X297来自受试者的血浆。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述制备含有伏罗尼布和X297的样品溶液包括：向受试者的血浆中加入内标工作液，然后加入沉淀剂乙腈，将所得混合物离心，取上清液进行干燥得到固体，将该固体用由乙腈和水组成的稀释液溶解并且混匀。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述伏罗尼布的去簇电压DP为50至120V，优选为80V，并且所述伏罗尼布的碰撞能量CE为20至40V，优选为30V。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述X297的去簇电压DP为50至120V，优选为76V，并且所述X297的碰撞能量CE为15至40V，优选为22V。