[发明专利]一种高效促进纤维环源干细胞增殖的方法

权利要求书

1.一种高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制Collagel凝胶培养基质，备用；

所述Collagel凝胶培养基质包括如下成分：

试剂A：5×MEM；

试剂B：FBS(胎牛血清)；

试剂C：1M Hepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)；

试剂D：0.1M NaOH与5×MEM的混合液；

Collagel凝胶：2-10mg/ml COL1(Ⅰ型胶原蛋白)与0.01M HCl的混合液；

(2)取分离的纤维环源干细胞，制成单细胞悬液，并计数；

(3)将所述细胞与所述Collagel凝胶培养基质混合均匀，得到细胞-Colagel悬液；

(4)取步骤(3)得到的细胞-Colagel悬液加入至细胞培养板中，置于CO₂培养箱中进行细胞培养；

(5)将步骤(4)培养后的细胞置于细胞组织力学加载培养与分析系统，对所述纤维环源干细胞进行动态压力刺激，并继续细胞培养，即得。

2.根据权利要求1所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述Collagel凝胶培养基质的配置步骤具体包括：

(a)取所述试剂A、试剂B和试剂C进行混合，备用；

(b)另取试剂D和Collagel，并调节混合液pH7.0-7.2，备用；

(c)分别将上述步骤(a)和(b)制备的混合液混匀，即得。

3.根据权利要求1或2所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述试剂A、试剂B、试剂C、试剂D和Collagel的体积比为(6-10)：(2-8)：(0.5-2)：(1-3)：(30-40)。

4.根据权利要求1-3任一项所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，还包括调节细胞浓度，使平均Collagel培养基基质中细胞浓度为2.0×10⁵细胞/mL的步骤。

5.根据权利要求4所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，还包括将所述细胞-Colagel悬液进行固液分离并收集细胞以所述Collagel培养基质进行重悬的步骤。

6.根据权利要求1-5任一项所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述细胞培养步骤为置于35-40℃、3-8％CO₂恒温培养。

7.根据权利要求1-6任一项所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述动态压力刺激步骤中，控制压力为20-90kPa。

8.根据权利要求7所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，控制所述动态压力刺激步骤的作用时间为3-12h。

9.根据权利要求1-8任一项所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述细胞培养步骤为置于35-40℃、3-8％CO₂恒温培养。

10.由权利要求1-9任一项所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法培养的纤维环源干细胞。