[发明专利]结核分枝杆菌的蛋白片段、基因片段、检测试剂盒及制备方法与应用

说明书

本申请提供了结核分枝杆菌的蛋白片段、基因片段、检测试剂盒及制备方法与应用，属于医学及生物工程领域。本申请提供的结核分枝杆菌的蛋白片段，具有较好的特异性，通过原核表达的方式表达得到的蛋白片段，在保持蛋白片段的抗原特异性的基础上；能快速和大量的获得目的蛋白片段；方便进行检测和分析。结核分枝杆菌的蛋白片段与抗结核分枝杆菌的抗体进行反应，能检测抗体的灵敏度和特异性情况；具备较好的应用价值。

技术领域

本申请主要涉及医学及生物工程领域，具体而言，涉及结核分枝杆菌的蛋白片段、基因片段、检测试剂盒及制备方法与应用。

背景技术

目前临床上诊断结核性胸腔积液的结核分枝杆菌抗原主要有：结核抗体38KD、16KD，但其灵敏度和特异性均不能满足WHO提出的结核抗体诊断的灵敏度应该达到80％以上，特异度达到95％以上的要求。

申请内容

本申请的第一方面，公开了结核分枝杆菌的蛋白片段，蛋白片段包括Rv1419片段和Rv2041c片段；Rv1419片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，Rv2041c片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

Rv1419片段和Rv2041c片段是结核分期杆菌HRV37株的标志性抗原片段，因此利用HRV37株Rv1419片段和Rv2041c片段能起到较好的检测和分析结核分期杆菌的目的。

本申请的第二方面，公开了结核分枝杆菌的基因片段，基因片段包括编码Rv1419蛋白的Rv1419基因片段，和编码Rv2041c蛋白的Rv2041c基因片段；Rv1419的基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，Rv2041c基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本申请的第三方面，公开了结核分枝杆菌的检测试剂盒，检测试剂盒还包括Rv1419蛋白片段和Rv2041c蛋白片段。

在实施例中，通过在试剂盒中保留Rv1419蛋白片段和Rv2041c蛋白片段，就能通过Rv1419蛋白片段和Rv2041c蛋白片段快速实现样本的检测。

本申请第四方面，公开了核分枝杆菌的检测试剂盒的制备方法，制备方法包括以下步骤：

分别合成Rv1419基因片段和Rv2041c基因片段，并通过DNA连接酶分别将Rv1419基因片段和Rv2041c基因片段连接到表达质粒，得到重组表达质粒；

将重组表达质粒转化入宿主细胞，通过培养并诱导表达，得到Rv1419蛋白片段和Rv2041c蛋白片段。

在实施例中，通过合成编码Rv1419蛋白片段和Rv2041c蛋白片段的基因片段，并将基因片段连接到表达质粒中，通过诱导表达，就能获得大量的Rv1419蛋白片段和Rv2041c蛋白片段，就可以应用于检测。

前述的第四方面的一些实施例中为表达质粒为pET-21b和pET28a。

通过表达质粒，就能通过诱导，快速准确的表达出目的蛋白，并通过纯化，得到Rv1419蛋白片段和Rv2041c蛋白片段。

在前述的第四方面的一些实施例中，诱导表达的诱导剂为IPTG，所述诱导剂的终浓度为1mmol/L。