[发明专利]AKAP1蛋白作为治疗代谢相关疾病的药物靶点的应用及方法

权利要求书

1.AKAP1蛋白作为治疗代谢相关疾病的药物靶点的应用，其特征在于，所述靶向AKAP1蛋白在治疗代谢相关疾病中的用途，包括下列作用中的一项或多项：

1)治疗胰岛素抵抗；

2)治疗胰岛素抵抗相关疾病；

3)治疗脂肪肝；

4)治疗肥胖；

5)促进胰岛素介导的糖摄取能力；

6)促进胰岛素的降糖作用；

7)降低血浆中非酯化脂肪酸的浓度；

8)降低血浆中甘油三酯的浓度；

9)降低血浆中胆固醇的浓度；

10)降低空腹血糖浓度；

11)提高糖耐量。

2.根据权利要求1所述的AKAP1蛋白作为治疗代谢相关疾病的药物靶点的应用，其特征在于，所述胰岛素抵抗相关疾病为下列疾病中的一种或多种：

1)胰岛素抵抗综合征；

2)代谢综合征；

3)肥胖；

4)高血糖；

5)糖尿病；

6)冠心病；

7)高血压；

8)高血脂；

9)高胆固醇；

10)脂代谢紊乱；

11)心脑血管疾病；

12)高胰岛素血症；

13)葡萄糖耐量受损。

3.AKAP1蛋白作为治疗代谢相关疾病的药物靶点的方法，其特征在于，具体包括下列步骤：

步骤一：准备敲除AKAP1蛋白的小鼠和对照野生型小鼠，并在不同条件下饲养，分别获得高脂饲养组小鼠和正常饮食组的AKAP1^-/-小鼠以及对照野生型小鼠；

步骤二：合成AKAP1抑制肽

设计合成靶向结合目的蛋白——AKAP1蛋白的特定序列的肽段，竞争性结合线粒体靶向结构域的核心区域，抑制AKAP1蛋白定位到线粒体外膜中，所述线粒体靶向结构域的核心区域包含21个氨基酸残基；采用Fmoc固相合成法合成AKAP1抑制肽，具体步骤如下：

1)缩合：聚苯乙烯树脂溶胀后加入缩合试剂室温下反应，期间检测Fmoc保护的氨基酸与树脂的缩合程度，达到反应要求时终止反应，封闭未反应的羟基，此时将第一个氨基酸与树脂连接；

2)去保护：采用六氢吡啶与DMF的混合液脱去树脂上的Fmoc保护基；

3)激活：利用缩合试剂活化氨基酸的羧基；

4)交联：在脱去Fmoc保护基的氨基酸溶液中，加入羧基活化、氨基Fmoc保护的氨基酸，发生耦连反应延长肽链；

5)延长肽链：重复第3和第4步，直至目标肽链形成；

6)从树脂上分离肽链：利用三氟乙酸盐溶液切下目的肽链，过滤，在滤液中加入醚，沉淀目的肽链，静置5～10min，离心得到目的多肽粗品；

7)纯化多肽：通过HPLC纯化目的多肽粗品，得到多肽纯品，所述多肽纯品的纯度95％；

8)多肽鉴定：通过MS鉴定多肽；

9)修饰：在肽的N-末端设计包含6个氨基酸残基的细胞穿膜肽，所述细胞穿膜肽的序列号为RRRRRR，同时N端进行乙酰化，C端酰胺化；

10)制备AKAP1抑制肽多肽冻干粉末于-20℃条件下保存；

步骤三：将AKAP1抑制肽多肽冻干粉末的肽段溶解于生理盐水中，并以2mg/kg/day的注射量，将AKAP1抑制肽和生理盐水分别注射于小鼠肩胛区皮下棕色脂肪组织内，检测对照小鼠体重以及葡萄糖耐量。

4.根据权利要求3所述的AKAP1蛋白作为治疗代谢相关疾病的药物靶点的方法，其特征在于，所述Fmoc保护基的去除采用碱性溶剂。