[发明专利]一种检测冠状病毒多重real-time PCR试剂盒、方法和应用在审
| 申请号： | 202010683145.1 | 申请日： | 2020-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN111893215A | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 陈豪;应斌武;李为民;宋兴勃;柯博文;陆小军;吴涛 | 申请（专利权）人： | 四川大学华西医院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 成都科海专利事务有限责任公司 51202 | 代理人： | 李俊 |
| 地址： | 610041 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 冠状病毒 多重 real time pcr 试剂盒 方法 应用 | ||
1.一种检测冠状病毒多重real-time PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测SARS-CoV-2、冠状病毒NL63/229E和冠状病毒OC43/HKU1的试剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括用于检测SARS-CoV-2的第一探针和特异性扩增SARS-CoV-2靶标基因的第一引物对、用于检测SARS-CoV-2的第二探针和特异性扩增SARS-CoV-2靶标基因的第二引物对、用于检测冠状病毒NL63/229E的探针和特异性扩增冠状病毒NL63/229E靶标基因的引物对、用于检测冠状病毒OC43/HKU1的探针和特异性扩增冠状病毒OC43/HKU1靶标基因的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测SARS-CoV-2的第一探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述特异性扩增SARS-CoV-2靶标基因的第一引物对序列如SEQID NO:2和SEQ ID NO:3所示；
所述检测冠状病毒NL63/229E的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述特异性扩增冠状病毒NL63/229E靶标基因的引物对序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；
所述检测冠状病毒OC43/HKU1的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述特异性扩增冠状病毒OC43/HKU1靶标基因的引物对序列如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示；
所述检测SARS-CoV-2的第二探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述特异性扩增SARS-CoV-2靶标基因的第二引物对序列如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应缓冲液、酶混合物、阳性对照和阴性对照。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包含MgCl2、dNTPsMixture，所述酶混合物包含AMV逆转录酶、RNA酶抑制剂、Taq DNA聚合酶，所述阳性对照为含目的基因的质粒混合物，所述阴性对照为无核酸酶水。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述SARS-CoV-2的第一检测通道为FAM，所述冠状病毒NL63/229E的检测通道为VIC，所述冠状病毒OC43/HKU1的检测通道为TexasRed，所述SARS-CoV-2的第二检测通道为Cy5。
7.一种同时检测SARS-CoV-2、冠状病毒NL63/229E和冠状病毒OC43/HKU1的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将采集到的临床样本进行微生物核酸提取并纯化，得到待测样品；采用所述检测冠状病毒多重real-time PCR试剂盒对待测样品进行检测，得到检测数据；以及对检测数据进行读取，得到检测结果。
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