[发明专利]Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种Taq酶5’‑3’聚合酶活性封闭单克隆抗体，其包含含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区和含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区，所述LCDR1的序列如SEQ ID NO：3所示，所述LCDR2的序列如SEQ ID NO：4所示，所述LCDR3的序列如SEQ ID NO：5所示，所述HCDR1的序列如SEQ ID NO：7所示，所述HCDR2的序列如SEQ ID NO：8所示，所述HCDR3的序列如SEQ ID NO：9所示。本发明还公开了所述的单克隆抗体的应用。本发明的单克隆抗体的封闭效果好，封闭率达到近100%。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域， 具体地说，是关于一种Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体及其应用。

背景技术

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是体外合成双链DNA的一种方法，其原理类似于天然DNA的复制过程，其特异性主要依赖于其目的片段两端互补的特异性引物。典型的PCR反应有三个步骤：变性，退火，延伸，经过多次循环反应，获得目的片段。

目前，提高PCR扩增特异性的方法有很多，最简单的方法就是采用热启动酶扩增。普通的DNA聚合酶最适温度是72℃，此时酶的活性最佳，小于此温度，酶具有较弱活性，5’-3’聚合酶活性和3’-5’外切酶活性均可发挥作用。这样，在PCR扩增由低温上升至高温的过程中，酶发挥较弱的活性，体系极易错配或形成引物二聚体，尤其是当设计的引物3’端是G或C，错配的链很难重新解开。要提高PCR扩增的特异性和降低反应错配率，可以人为的控制酶的活性，在热启动温度之前让酶不具备活性，这样就避免了在升温过程中（或配置反应体系）发生链的错配，从而保证扩增的特异性。

鉴于单克隆抗体与抗原结合的高亲和力特性，可以利用单克隆抗体封闭聚合酶的聚合酶活性。抗体法热启动酶可以提高PCR扩增的特异性，提高PCR产物的产量，增加长片段的检出率。

聚合酶是生命科学研究的基本工具，在高校、研究所等科研机构和生物技术公司应用极其广泛。成本低廉地生产封闭抗体将大大降低抗体法热启动聚合酶的生产成本。现有的Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体的封闭率通常只在90%左右，且封闭1 U的Taq酶5’-3’聚合酶活性需要的抗体量比较大。因此亟待一种封闭效果好的Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体。

发明内容

本发明采取杂交瘤技术制备抗Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体，筛选到可以完全封闭Taq酶5’-3’聚合酶活性的单克隆抗体，获得分泌高质量抗体的杂交瘤后，通过小鼠腹水大量生产抗体，这使得抗体的生产简单、成本低廉。本发明制备的封闭Taq酶5’-3’聚合酶活性单克隆抗体，可以用来制备Taq热启动酶。本发明中的杂交瘤将使封闭抗体的生产变得十分便利，使国产热启动Taq DNA聚合酶的品质得到改善。

因此，本发明的第一个目的在于提供一种Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体。本发明的第二个目的在于提供一种Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体的应用。本发明的第三个目的是提供一种Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体的制备方法。采用该方法制备出分泌Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体的杂交瘤可利用为低成本大规模抗体生产。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

作为本发明的第一个方面，一种Taq酶5’-3’聚合酶活性封闭单克隆抗体，包含含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区和含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区，其中，

所述LCDR1的序列如SEQ ID NO：3所示，

所述LCDR2的序列如SEQ ID NO：4所示，

所述LCDR3的序列如SEQ ID NO：5所示，