[发明专利]芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因及其专用引物和应用

说明书

本发明涉及芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因及其专用引物和应用，该内参基因是EF‑1α、ACT1、ACT2、UBQ1、UBQ2、UBQ3、eIF、His、TUB或RNA Pol II，内参基因的序列分别是SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9以及SEQ ID NO.10。本发明能够满足实时荧光定量PCR检测芍药中基因相对表达水平的要求，提高了芍药基因表达分析研究的稳定性、可靠性和效率。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因及其专用引物和应用。

背景技术

实时荧光定量PCR是在传统PCR基础上发展起来的一项既可定性、又可定量的PCR技术。因具有特异性强、灵敏度高且重复性好的优点，它是分析功能基因表达水平的常用方法之一。但采用该技术的检测结果常受到样本的影响，因此常采用内参基因来校准样品间误差，以保证其结果的准确性。内参基因是一类在不同条件或不同组织中均能稳定表达的持家基因，但并不是所有持家基因都可以作为内参基因。因此，常需要根据具体实验需要对内参基因筛洗。

芍药(Paeonia lactiflora Pall.)是我国的传统名花，因其花朵硕大、花色雅丽、花型丰富、花朵繁茂，而深受人们的喜爱，在园林中广泛应用。干旱常会对芍药的生长发育产生影响，它在干旱胁迫下会表现出叶片发黄和卷曲发干等现象，甚至使得全株干旱枯死，这显著降低了芍药植物的观赏价值。而开展全面深入的芍药响应干旱胁迫的分子生物学研究对于提高芍药耐旱能力起着关键作用。筛选合适的内参基因，利用实时荧光定量PCR技术分析芍药干旱胁迫下相关基因的表达水平，有助于阐明芍药响应干旱胁迫的分子机理。目前，仅见到用于芍药花瓣不同发育时期和不同组织的基因表达的内参基因筛选(李健，芍药实时定量PCR内参基因的筛选和验证，分子植物育种，2017，15(7)：2544-2549)，关于特异用于芍药干旱胁迫下基因表达的内参基因一直未见筛选。

发明内容

本发明针对现有技术的局限性，提供一种适用于芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因，该基因能够满足实时荧光定量PCR检测芍药中基因相对表达水平的要求，提高了芍药基因表达分析研究的稳定性、可靠性和效率。本发明还提供了上述内参基因的专用引物和应用。

本发明采用的技术方案：

一种芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因，所述芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因是EF-1α、ACT1、ACT2、UBQ1、UBQ2、UBQ3、eIF、His、TUB或RNA Pol II，所述内参基因是EF-1α的序列如SEQ ID NO.1所示；所述内参基因是ACT1的序列如SEQ ID NO.2所示；所述内参基因是ACT2的序列如SEQ ID NO.3所示；所述内参基因是UBQ1的序列如SEQID NO.4所示；所述内参基因是UBQ2的序列如SEQ ID NO.5所示；所述内参基因是UBQ3的序列如SEQ ID NO.6所示；所述内参基因是eIF的序列如SEQ ID NO.7所示；所述内参基因是His的序列如SEQ ID NO.8所示；所述内参基因是TUB的序列如SEQ ID NO.9所示；所述内参基因是RNA Pol II的序列如SEQ ID NO.10所示。

作为优选，本发明所采用的芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因优选是EF-1α、ACT1、ACT2、UBQ1、UBQ2、UBQ3、eIF、His、TUB或RNA Pol II，所述内参基因是EF-1α的序列如SEQ ID NO.1所示；所述内参基因是ACT1的序列如SEQ ID NO.2所示；所述内参基因是ACT2的序列如SEQ ID NO.3所示；所述内参基因是UBQ1的序列如SEQ ID NO.4所示；所述内参基因是UBQ2的序列如SEQ ID NO.5所示。

作为最优选，本发明的芍药干旱胁迫下实时荧光定量PCR内参基因优选是EF-1α。