[发明专利]以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及一种以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及其检测方法，属于核酸检测领域，具体是根据新型冠状病毒核酸N基因序列设计特异性引物，利用优化的高分辨率熔解曲线反应体系检测新型冠状病毒核酸，操作简单、速度快、PCR产物无需后处理、可以检测出单个碱基的差异、真正实现闭管操作。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

冠状病毒（Coronavirus，CoV）是一类严重危害人类和畜禽健康的致病微生物，普遍存在于自然界中，自然宿主包括人、牛、猪、犬、禽、猫、蝙蝠、鼠等，广泛宿主特点和自身基因组结构使其演变过程中较易发生基因变化，呈现基因遗传多样性，新冠状病毒和亚型不断出现。

高分辨率熔解曲线技术可作为一种新的新型冠状病毒核酸的检测手段，它以单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线为基础进行核酸检测，具有操作简单、速度快、低成本、高通量、结果准确、不受检测位点的局限、PCR 产物无需后处理、可以检测出单个碱基的差异等优势，实现真正的闭管操作从而降低污染风险，非常适合大量样品的分析。该方法可为口岸新型冠状病毒核酸检测和新型冠状病毒的防控提供技术支撑。

高分辨率熔解曲线技术可作为一种新的新型冠状病毒核酸的检测手段，它以单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线为基础进行核酸检测，具有操作简单、速度快、低成本、高通量、结果准确、不受检测位点的局限、PCR 产物无需后处理、可以检测出单个碱基的差异等优势，实现真正的闭管操作从而降低污染风险，非常适合大量样品的分析。该方法可为口岸新型冠状病毒核酸检测和新型冠状病毒的防控提供技术支撑。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供一种以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒检测核酸试剂盒及其检测方法可作为新型冠状病毒核酸新的检测手段，它以单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线为基础进行新型冠状病毒检测，操作简单、速度快、低成本、高通量、结果准确、不受检测位点的局限、PCR 产物无需后处理、可以检测出单个碱基的差异等优势，实现真正的闭管操作从而降低污染风险，非常适合大量样品的分析。并提供其操作方法。

本发明是由以下技术方案来实现的：

本发明设计了一组以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒核酸特异性检测引物，序列如下：

N-F：5’- GTGATGCTGCTCTTGCTT -3’；

N-R：5’- TTCCTTGGGTTTGTTCTG -3’。

利用上述的检测引物，本发明提供一种以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，包括如下成分：

1）新型冠状病毒N基因的特异性引物

N-F：5’- GTGATGCTGCTCTTGCTT -3’

N-R：5’- TTCCTTGGGTTTGTTCTG -3’。

2）PCR混合液：Ex Taq DNA聚合酶，反应缓冲液，dNTP混合液，ResoLight饱和荧光染料；

3）新型冠状病毒核酸逆转录的cDNA；

4）ddH2O；

5）25 mM MgCl₂。

本发明还提供一种以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒核酸检测方法，包括如下步骤：

1）高分辨率熔解曲线模板新型冠状病毒核酸的制备