[发明专利]疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法

说明书

本发明提供了一种疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法，它涉及：牛血清白蛋白抗体是通过直接免疫动物得到的，杂质新霉素抗体是通过制备出新霉素免疫原，进而免疫动物得到的，然后将得到的抗体应用于酶联免疫检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及抗体制备技术，具体涉及一种用于检测牛血清白蛋白和新霉素的抗体制备方法，制备出的抗体可应用于快速检测方法，用于测定疫苗中该类杂质的残留量。

背景技术

牛血清白蛋白广泛应用于基础、生化、教学、科研、药品、生物制品等相关实验室，尤其是在疫苗等生物制品生产过程中(如细胞和组织培养等)，一般均使用一定量的牛血清，各品种的终产品虽然均经过一定工艺加以去除，但仍可能残留少量的牛血清。牛血清作为一种致敏物质，可能会在疫苗接种后产生严重后果。因此，残余牛血清的检测是生物制品质量控制中的一个重要指标，而牛血清白蛋白(BSA)作为牛血清中的主要成分，世界卫生组织(WHO)及世界各国生物制品规程对其在制品中的残余含量均有严格限定。BSA含量的检测关系到制品的合格与否，进而影响到人体健康，甚至直接关系到生命的安全。另外，新霉素等抗生素也可能存在于疫苗中，是需要检测的杂质。

本申请研究出牛血清白蛋白和新霉素的抗体制备方法，以便应用于快速检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗体制备技术，具体涉及一种用于检测牛血清白蛋白和新霉素的抗体制备方法，制备出的抗体可应用于快速检测方法，比如酶联免疫试剂盒。

本发明的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、标准品溶液、抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原分别为新霉素偶联抗原、牛血清白蛋白，所述酶结合物分别为酶标记的新霉素抗体、牛血清白蛋白抗体。

所述新霉素偶联抗原是由新霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述新霉素半抗原是由硫酸新霉素与6-马来酰亚胺基-己醛等物质经过一系列化学反应得到，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、猪尿白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。

所述新霉素抗体是以新霉素偶联抗原作为免疫原制备获得，所述新霉素特异性抗体可为新霉素单克隆抗体或新霉素多克隆抗体，其中优选新霉素单克隆抗体。

所述牛血清白蛋白抗体是以牛血清白蛋白作为免疫原制备获得，所述牛血清白蛋白抗体可为牛血清白蛋白单克隆抗体或牛血清白蛋白多克隆抗体，其中优选牛血清白蛋白单克隆抗体。

所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶结合物是由酶和抗体偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液。

所述新霉素标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.5μg/L，1.5μg/L，4.5μg/L，13.5μg/L，40.5μg/L。

所述牛血清白蛋白标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.1μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L，8.1μg/L。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/L的硫酸溶液或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1～2mol/L氢氧化钠溶液。

所述洗涤液优选为pH值为7.4，含有0.5％～1.0％吐温-20、0.01‰～0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。