[发明专利]干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用

说明书

本发明涉及干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用，内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因、肌动蛋白ACT1基因、肌动蛋白ACT2基因、甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶GAPDH基因、真核生物翻译起始因子eIF1基因、真核生物翻译起始因子eIF2基因、微管蛋白α‑TUB基因、微管蛋白β‑TUB基因、RNA聚合酶II RNA Pol II基因或RNA聚合酶II转录因子RP II基因；上述基因的核苷酸序列详见序列表所示。本发明的目的在于提供一个干旱胁迫下凤丹基因表达谱中稳定表达的基因，以其作为凤丹干旱胁迫内参基因。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及干旱胁迫下凤丹内参基因及其专用引物和应用。

背景技术

内参基因是表达水平不受研究条件影响而恒定表达的基因，常被用于实时荧光定量PCR检测的校正。在日常实验过程中，传统使用的内参基因在不同条件下的表达水平可能是不稳定的，容易导致错误的结果甚至形成相悖的结论。因此，选择筛选出合适的基因作为内参基因用于基因表达量的参考和校正显得尤为重要。

凤丹(Paeonia ostii)是芍药科芍药属多年生木本植物，是杨山牡丹的变种。因其具有很高的药用价值、观赏价值和油用价值而被大力推广种植。凤丹在干旱胁迫下会出现叶片颜色萎蔫、焦枯，其各项生理指标也明显下降。筛选干旱胁迫相关的关键基因，对于缓解干旱胁迫对凤丹的伤害、改善凤丹在干旱或半干旱地区的种植情况具有十分重要的理论和实践意义。在对干旱胁迫下凤丹基因表达差异的研究过程中，需要稳定可靠的内参基因作为参照来进行实时荧光定量PCR检测和验证基因的表达水平，因此筛选凤丹干旱胁迫条件下稳定表达的内参基因对其实时荧光定量PCR检测结果的准确性起着关键作用。而前人只有以油用牡丹成熟种子为材料开展过实时荧光定量PCR内参候选基因的筛选(张莞晨，阮成江，李景滨，韩平，丁健，刘祾悦，吴波，阮东，四种木本油料内参基因筛选及.4ctin基因时空表达分析，分子植物育种，2018，14：4576-4582)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干旱胁迫下凤丹基因表达谱中稳定表达的基因，以其作为凤丹干旱胁迫内参基因。

本发明还提供了用于扩增所述的干旱胁迫下凤丹内参基因的专用引物及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种干旱胁迫下凤丹内参基因，所述干旱胁迫下凤丹内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因、肌动蛋白ACT1基因、肌动蛋白ACT2基因、甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因、真核生物翻译起始因子eIF1基因、真核生物翻译起始因子eIF2基因、微管蛋白α-TUB基因、微管蛋白β-TUB基因、RNA聚合酶II RNA Pol II基因或RNA聚合酶II转录因子RP II基因；所述TATA盒结合蛋白TBP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述肌动蛋白ACT1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述肌动蛋白ACT2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述真核生物翻译起始因子eIF1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述真核生物翻译起始因子eIF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述微管蛋白α-TUB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述微管蛋白β-TUB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述RNA聚合酶II RNA PolII基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述RNA聚合酶II转录因子RP II基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

作为优选地，所述干旱胁迫下凤丹内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因。

本发明内容还包括用于扩增如前所述的干旱胁迫下凤丹内参基因的专用引物，所述内参基因是TATA盒结合蛋白TBP基因的引物序列是：

F：5’-GTAATGCTGAATACAATCCC-3’；