[发明专利]痔宁片HPLC标准指纹图谱的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种痔宁片HPLC标准指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：(1)取芍药苷对照品、黄芩苷对照品、没食子酸对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、芦丁对照品、杨梅苷对照品，用50%甲醇溶液溶解，制成混合对照品溶液；(2)取痔宁片粉末1.0g，置具塞锥形瓶中，加入50mL50%的甲醇溶液，超声处理30min，冷却，并以50%的甲醇溶液补重，摇匀，滤过，取续滤液；(3)将样品溶液在高效液相色谱中进行梯度洗脱，得到HPLC标准指纹图谱。还公开了一种根据上述构建方法得到的标准指纹图谱在痔宁片质量检测方面的应用。本方法更能准确的把关药品的质量，保证痔宁片的质量稳定性。

技术领域

本发明涉及痔宁片的质量检测领域，具体而言，涉及一种痔宁片HPLC标准指纹图谱的构建方法及其应用。

背景技术

痔宁片收录于2015版《中国药典》一部，由地榆炭、侧柏叶炭、地黄、槐米、酒白芍、荆芥炭、当归、黄芩、枳壳、刺猬皮（制）、乌梅、甘草制得。功能为清热凉血，润躁疏风，用于实热内结或湿热瘀滞所致的痔疮出血，肿痛。痔宁片现有的质量监控体系是采用HPLC法测定本品中芦丁的含量测定；采用薄层色谱对地黄、酒白芍、当归、枳壳进行鉴别，采用HPLC法对黄芩进行鉴别。含量测定成分单一，不能客观地从整体上评价中药的内在质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种痔宁片指纹图谱建立方法及其应用，该方法能有效的表征其质量，克服现有技术质量控制方法的单一性的缺陷，实现全方位多方面的检测痔宁片，以提高痔宁片整体的品质，完善质量检测体系，利于药品本身的扩大应用范围。

本发明的痔宁片HPLC标准指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

(1)取芍药苷对照品、黄芩苷对照品、没食子酸对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、芦丁对照品、杨梅苷对照品，用50%甲醇溶液溶解，制成混合对照品溶液，每1mL混合对照品溶液中含芍药苷60μg、黄芩苷0.2mg、没食子酸25μg、柚皮苷0.2mg、橙皮苷35μg、芦丁0.2mg、杨梅苷0.1mg；

(2)取痔宁片粉末1.0g，置具塞锥形瓶中，加入50mL50%的甲醇溶液，称重，超声处理30min，冷却，重新称重，并以50%的甲醇溶液补重，摇匀，滤过，取续滤液；

 (3)将样品溶液在高效液相色谱中进行梯度洗脱，得到HPLC标准指纹图谱；高效液相色谱的流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.05-0.2％的磷酸水溶液。

优选地，所述痔宁片用地榆炭、侧柏叶炭、地黄、槐米、酒白芍、荆芥炭、当归、黄芩、枳壳、刺猬（制）、乌梅、甘草；所述痔宁片的制备方法为：当归、枳壳提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与地榆炭、侧柏叶炭、地黄、槐米、酒白芍、荆芥炭、黄芩、刺猬皮（制）、乌梅 、甘草，加水煎煮二次，每次3小时，滤过，合并滤液，滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35（80℃）的清膏，低温干燥，粉碎，制粒，喷入上述挥发油，压片，包薄膜衣。

优选地，流动相B为体积分数0.1％的磷酸水溶液。

优选地，高效液相色谱的操作条件是：Welch ultimate AQ-C18色谱柱250mm×4.6mm，5μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.1％的磷酸水溶液，梯度洗脱；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量10μL，洗脱程序是：

0～40min流动相A：B由5％：95％→20％：80％；

40～50min流动相A：B由20％：80％→24％：76％；

50～60min流动相A：B由24％：76％→30％：70％；

60～70min流动相A：B由30％：70％→35％：65％；

70～85min流动相A：B由35％：65％→5％：95％；流动相A与B的比例为体积比。