[发明专利]用于检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的引物组、探针及方法

权利要求书

1.一种用于多重TaqMan荧光定量PCR检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的引物组，其特征在于，检测APPV的引物组包含：如SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO. 2所示核苷酸序列的下游引物；检测CSFV的引物组包含：如SEQ ID NO. 4所示核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO. 5所示核苷酸序列的下游引物；检测PCV3的引物组包含：如SEQ IDNO. 7所示核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO. 8所示核苷酸序列的下游引物；检测PTV1的引物组包含：如SEQ ID NO. 10所示核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO. 11所示核苷酸序列的下游引物。

2.一种用于多重TaqMan荧光定量PCR检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的引物探针组，其特征在于，该引物探针组包含：如权利要求1所述的用于多重TaqMan荧光定量PCR检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的引物组，及用于多重TaqMan荧光定量PCR检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的TaqMan探针组；该TaqMan探针组的序列如下：

检测APPV的TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示；检测CSFV的TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示；检测PCV3的TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 9所示；检测PTV1的TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 12所示。

3.根据权利要求2所述的引物探针组，其特征在于，所述检测APPV的TaqMan探针的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记MGB基团。

4.根据权利要求2所述的引物探针组，其特征在于，所述检测CSFV的TaqMan探针的5’端标记HEX荧光基团，3’端标记BHQ1基团。

5.根据权利要求2所述的引物探针组，其特征在于，所述检测PCV3的TaqMan探针的5’端标记ROX荧光基团，3’端标记BHQ2基团。

6.根据权利要求2所述的引物探针组，其特征在于，所述检测PTV1的TaqMan探针的5’端标记CY5荧光基团，3’端标记BHQ2基团。

7.一种非疾病诊断的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，其特征在于，该方法采用的荧光定量RT-PCR反应体系为：Premix Ex Taq、如权利要求2-6中任意一项所述的引物探针组，以及待检测样品的DNA，通过所述荧光定量RT-PCR反应体系进行荧光定量PCR，并以分别含APPV、CSFV、PCV3和PTV1的pMD-APPV、pMD-CSFV、pMD-PCV3和pMD-PTV1四种标准质粒进行荧光定量RT-PCR反应并绘制标准曲线，根据检测结果是否出现典型的扩增曲线来判断是否含有CSFV、PTV1、PCV3、APPV病毒，通过建立的标准曲线对检测样品进行定量分析。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述荧光定量RT-PCR反应的程序为：95℃ 5min；95℃ 30s、56 ℃ 30s，40个循环，退火阶段收集荧光信号。

9.一种用于多重TaqMan荧光定量PCR检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中的引物和探针 为如权利要求2-6中任意一项所述的引物探针组。