[发明专利]一种前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法

权利要求书

1.一种前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将海洋来源萎缩芽孢杆菌B.atrephaeus C89经菌种活化，种子培养后用于后续发酵；

S2、配制前体化合物：用人工海水配置6-氯-色氨酸母液，过滤除菌备用；

S3、在B.atrephaeus C89发酵的对数生长期起始阶段加入步骤S2配制的前体化合物而后继续发酵；

S4、B.atrephaeus C89发酵结束后分离纯化发酵液即可得到Bacillamide氯代类似物：6-Cl-Bacillamide C

2.如权利要求1所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，步骤S1中，用于菌种活化的培养基为LB固体培养基，用于种子培养、发酵的培养基均为LB液体培养基。

3.如权利要求2所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，所述LB液体培养基是由每1L人工海水中溶入10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠配制成的；所述LB固体培养基是由每1L人工海水中溶入10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠、15-20g琼脂粉配制而成。

4.如权利要求3所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，所述人工海水成分为：氯化钠26-27g/L，氯化镁2-3g/L，硫酸镁3-4g/L，氯化钙1-2g/L，氯化钾0.5-1g/L，碳酸氢钠0.1-0.2g/L，溴化钠0.05-0.1g/L，用超纯水逐个溶解各成分，调节pH至7.0-7.2。

5.如权利要求1所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，步骤S3中，前体化合物添加时间为发酵开始之后的5-7h，发酵结束时间为48h后。

6.如权利要求5所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，所述前体化合物添加的工作浓度为0.2-0.6mM。

7.如权利要求1所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述分离纯化步骤为：发酵结束后立即加入一定体积的乙酸乙酯萃取过夜，减压过滤后的上清继续用乙酸乙酯进行萃取，萃取后的有机相溶液旋蒸吹干后即得含有6-Cl-Bacillamide C的粗浸膏。

8.如权利要求7所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，所述分离纯化步骤还包括：将粗浸膏用甲醇溶解，利用凝胶过滤层析对粗浸膏进行分离。

9.如权利要求8所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，凝胶过滤层析所用填充材料为葡聚糖凝胶sephadex LH-20，流动相为甲醇，利用高效液相色谱HPLC对洗脱液进行分析，确定6-Cl-Bacillamide C差异峰所在组成。

10.如权利要求9所述的前体指导的Bacillamide卤代类似物的制备方法，其特征在于，利用半制备型高效液相色谱对含有6-Cl-Bacillamide C差异峰所在组成进一步分离，即可得到6-Cl-Bacillamide C。