[发明专利]一种circ RNA作为肝细胞癌诊断标志物及治疗靶点的应用

说明书

一种肝癌诊断标志物及治疗靶点的应用，本发明涉及分子生物学领域，具体是一种circ RNA在肝细胞癌诊断及靶向治疗中的应用。所述circ RNA标志物为hsa_circRNA_0000384，研究发现肝细胞癌组织中hsa_circRNA_0000384的表达显著高于癌旁组织及正常组织，hsa_circRNA_0000384高表达暗示肝细胞癌患者的不良预后。同时本发明还涉及一种特异降低肝癌细胞系hsa_circRNA_0000384表达的siRNA,并证实其可以抑制肝癌细胞增殖与迁移，所述siRNA可作为肝细胞癌治疗的靶点。

技术领域

本发明属于生物技术和生物医学邻域，具体涉及hsa_circRNA_0000384作为肝细胞癌诊断的标志物和治疗靶点。

背景技术

肝癌（Liver Cancer）是全球第六大常见癌症，也是致死率第四的癌症。2018年全球新增肝癌病例84.1万例，肝癌死亡病例78.2万例。中国恶性肿瘤流行情况分析显示2015年我国新增肝癌病例37万例，位列主要癌症新发病例第四位；肝癌死亡病例32.6万例，位列主要癌症死亡病例第二位。原发性肝癌主要分为肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC），占比为75%-85%；胆管癌（Intrahepatic cholangiocarcinoma），占比为10%-15%。早期肝细胞癌不易发现，多数肝细胞癌患者被确诊时已处于中晚期。肝癌的治疗主要以手术、放疗、化疗为主，但是预后较差，患者存活期普遍较短。目前尚未有特异的肝细胞癌早期诊断靶标及预后生物标志物，且肝细胞癌靶向治疗药物的研发依然没有实质突破。因此，寻找肝细胞癌早期诊断特异性标志物，同时以标记物为突破口研发肝细胞癌靶向药物意义重大。

环状RNA（circular RNA, circ RNA）与micro RNA、长链非编码RNA同属于非编码RNA家族，近年来环状RNA已经成为非编码RNA研究领域的热点，受到广泛关注。环状RNA是一类不具有游离的5'末端帽子和3'末端 poly (A)尾巴而主要依赖于反向剪接机制以共价键形式形成的闭合环状RNA分子。目前的研究结果表明，环状RNA在人体内广泛表达，且在不同组织器官中具有特异性，其主要作用是作为microRNA的内源竞争性结合分子调控下游基因的表达；作为RNA结合蛋白的诱饵调控RNA结合蛋白的功能；作为蛋白的脚手架分子调控蛋白的修饰；直接翻译多肽等。越来越多的证据表明环状RNA在肝细胞癌发生、发展中发挥着重要的作用，因此环状RNA有望成为肝细胞癌理想的诊断标志物和治疗靶点。

发明内容

为了实现肝细胞癌的早期诊断及靶向治疗，本发明提供了hsa_circRNA_0000384作为肝细胞癌早期诊断靶标及临床治疗靶点。

本发明的第一个目的是提供一种环状RNA用于肝细胞癌诊断的标志物。

本发明的第二个目的是提供一种肝细胞癌特异性诊断试剂盒。

本发明的第三个目的是提供一种环状RNA作为肝细胞癌的治疗靶点。

为实现第一个目的，本发明提供在肝细胞癌中显著高表达circRNA为生物标志物，所述标志物为hsa_circRNA_0000384。SEQ ID No.1所示，环化序列由420个碱基组成。

为实现第二个目的，本发明采取的技术方案是：提供了一种基于荧光定量PCR的检测试剂盒，其中包含hsa_circRNA_0000384的特异检测引物。

荧光定量PCR的检测引物序列如下

F: 5'-CCCCAGAGCACGAGTAGTAG-3'

R: 5'-TGCTGCAACTGGGTAAACAC-3'

beta-actin内参引物序列如下

F: 5'-AGTGTGACGTGGACATCCGCA-3'

R: 5'-ATCCACATCTGCTGGAAGGTGGAC-3'