[发明专利]一种在高水活度介质中催化合成L-抗坏血酸油酸酯的方法在审
| 申请号： | 202010691269.4 | 申请日： | 2020-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN111733196A | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 姚冬生;郑少燕;芦根;刘大岭;谢春芳;刘桂祯;黄炯威;劳伟明 | 申请（专利权）人： | 暨南大学;开平牵牛生化制药有限公司 |
| 主分类号： | C12P17/04 | 分类号： | C12P17/04;C12P7/64;C12N9/20 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘宇峰 |
| 地址： | 510632 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高水活度 介质 催化 合成 抗坏血酸 油酸 方法 | ||
1.一种在高水活度介质中催化合成L-抗坏血酸油酸酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：以油酸乙酯和L-抗坏血酸为底物，混合后加入脂肪酶，置于高水活度的水/脂质双相介质中，由重组脂肪酶催化合成L-抗坏血酸油酸酯；所述重组脂肪酶是基于Candidaparapsilosis来源的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的脂肪酶的重组脂肪酶。
2.根据权利要求1所述的在高水活度介质中催化合成L-抗坏血酸油酸酯的方法，其特征在于：所述水/脂质双相介质的水活度aw0.9。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述水/脂质双相介质为50mM、pH6.5磷酸缓冲液和油酸乙酯乳化液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述由重组脂肪酶催化合成L-抗坏血酸油酸酯的过程是：40℃、180rpm搅拌反应体系，反应2.5小时后，从反应体系中分离纯化制得L-抗坏血酸油酸酯。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分离纯化方法为：每2.2mL的反应体系加入2mL乙酸乙酯，再加入0.792g氯化钠，涡旋混匀3min，萃取L-抗坏血酸油酸酯，然后5000rpm，离心5min。取上清，将上清液加热至77℃挥干乙酸乙酯，得到L-抗坏血酸油酸酯。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所加入的反应底物L-抗坏血酸的浓度在反应体系中的终浓度为0.2-2.2mol/L,油酸乙酯的终浓度为15-250mmol/L。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述重组脂肪酶是通过酵母分泌表达的重组脂肪酶。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述重组脂肪酶在反应体系中的终浓度为0.05-2mg/mL。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述重组脂肪酶是通过酵母展示的重组脂肪酶。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述重组脂肪酶在反应体系中的终浓度为0.01-0.5g/mL。
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