[发明专利]生物矿化型固定脂肪酶的制备方法及其在催化合成OPO中的应用

权利要求书

1.一种生物矿化型固定脂肪酶的制备方法，其特征在于：在磷酸盐缓冲液中，加入脂肪酶和一定比例的氯化钙溶液，随后将混合物静置于1～8℃，得到固定化脂肪酶。

2.根据权利要求1所述的生物矿化型固定脂肪酶的制备方法，其特征在于：所述脂肪酶为疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶。

3.根据权利要求2所述生物矿化型固定脂肪酶的制备方法，其特征在于脂肪酶通过下述方法得到：首先，在pPIC9K载体上构建疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因，然后将重组质粒转移至毕赤酵母菌株GS115中，诱导表达后获得脂肪酶。

4.根据权利要求1或3所述生物矿化型固定脂肪酶的制备方法，其特征在于：磷酸盐缓冲液的浓度为0.02mol·L^-1，pH为7.0。

5.根据权利要求1所述生物矿化型固定脂肪酶的制备方法，其特征在于：加入的脂肪酶的终浓度为0.05～0.25mg·mL^-1。

6.根据权利要求1所述生物矿化型固定脂肪酶的制备方法，其特征在于：加入的氯化钙溶液的浓度为0.2mol·L^-1，磷酸盐缓冲液体积与氯化钙溶液体积比为40～60：1。

7.根据权利要求4所述生物矿化型固定脂肪酶的制备方法，其特征在于具体包括下述步骤：在100mL磷酸盐缓冲液中，加入终浓度为0.1mg·mL^-1的脂肪酶和2mL氯化钙溶液，随后将混合溶液放置在4℃下放置24小时，10000rpm离心10min，得到固定化脂肪酶。

8.权利要求1所述生物矿化型固定脂肪酶在催化合成OPO中的应用。

9.根据权利要求8所述生物矿化型固定脂肪酶在催化合成OPO中的应用，其特征在于包括下述步骤：加入底物三棕榈酸甘油酯、油酸、固定化脂肪酶、正己烷，在摇床中反应得到OPO。

10.根据权利要求9所述生物矿化型固定脂肪酶在催化合成OPO中的应用，其特征在于包括下述步骤：所述三棕榈酸甘油酯、油酸的摩尔比为1：2～10，反应中含水量为2％；摇床反应条件为：温度25～55℃，转速220rpm。