[发明专利]一种检测光敏有机染料产生超氧阴离子自由基的方法

说明书

本发明公开了一种以盐酸羟胺为探针在可见光照射下检测光敏有机染料产生超氧阴离子自由基的方法。将含有盐酸羟胺的光敏有机染料在可见光下照射，然后向样品溶液中加入三价铁离子溶液。与超氧阴离子自由基反应后剩余的盐酸羟胺将溶液中的三价铁离子还原成二价的亚铁离子。然后，加入1,10‑菲啰啉溶液，在510nm处进行分光光度法测量，510nm处的吸光度值间接表明盐酸羟胺的剩余量。超氧阴离子自由基的产量可用盐酸羟胺的减少量间接表示。在最佳实验条件下，线性范围为0.0‑1.6×10^‑5M，方法的检测限和定量限分别为8.23×10^‑7和2.49×10^‑6M，R²为0.9995。该方法简单可行,可用于稳定测量可见光照射下光敏有机染料产生的超氧阴离子自由基。

技术领域

本发明属于检测分析技术领域，具体是一种简便灵敏的在可见光照射下检测光敏有机染料产生超氧阴离子自由基的方法。

背景技术

通过光照产生活性氧是光化学过程中各种化学效应的主要机制。自由基，特别是超氧阴离子自由基(O₂·^-)，已在光化学过程中得到了广泛的重视和应用。因此，目前迫切需要一种能够可靠，快速的检测光照系统中O₂·^-的检测方法。通常用于检测O₂·^-的方法是电子自旋共振法(ESR)，高效液相色谱法(HPLC)和化学发光法(CL)。上述方法存在许多缺点：比如要用到高端的仪器，一般实验室达不到此条件，操作复杂，要用到多种仪器和药品。与上述方法相比，分光光度法是最快最便捷的方法，而且对于微量样品也很适用，优点是低成本且易于小型化。硝基蓝四氮唑(NBT)和2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2H-四唑钠盐(WST-1)是测定O₂·^-最常用的分光光度探针。NBT被O₂·^-氧化成NBT甲臜，该甲臜在560nm处可用分光光度法测定。但是，NBT在可见光照射下不稳定，而且NBT甲臜是不溶于水的，这导致NBT在水溶液中不可用。此外，另一个主要的探针WST-1与O₂·^-发生反应，可以生成WST-1甲臜，在438nm处具有最大吸光度。由于WST-1甲臜具有高度水溶性，因此WST-1被广泛应用于各种生物学和化学实验中。尽管如此，WST-1是非常昂贵的，并且该方法的最佳pH为8.0，这导致了该方法在酸性条件下不适用。

NH₂OH·HCl也可作为O₂·^-的分光光度探针。NH₂OH·HCl被O₂·^-氧化为NO₂^-。

NH₂OH+2O₂·^-+H⁺→NO₂^-+H₂O₂+H₂O (1)