[发明专利]一种提高猪繁殖与呼吸综合征病毒体外培养感染量的方法及其应用

权利要求书

1.一种提高猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV体外培养感染量的方法，其特征在于，在MARC-145细胞或PAMs体外培养PRRSV过程中添加胰蛋白酶或弹性蛋白酶；

所述胰蛋白酶的浓度为100μg/mL～200μg/mL；弹性蛋白酶的浓度为0.5mg/mL～1mg/mL。

2.如权利要求1所述提高PRRSV体外培养感染量的方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)将MARC-145细胞按5×10⁴个/mL铺设24孔细胞培养板，每孔加入500μL的DMEM培养基，于37℃CO ₂培养箱中培养12h；

(2)更换新的DMEM培养基，以病毒感染复数为1的高致病性PRRSV HN07-1毒株于4℃孵育MARC-145细胞1h；弃细胞上清，用PBS缓冲液洗细胞三次，洗去未结合细胞的病毒粒子；

(3)向细胞培养板孔中分别加入无细胞毒性的胰蛋白酶或弹性蛋白酶，室温处理15min；弃细胞上清，用PBS缓冲液洗细胞三次，向细胞培养板孔中加入500μL的DMEM培养基，37℃培养12h或48h。

3.如权利要求1任一项所述提高PRRSV体外培养感染量的方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)将PAMs按2×10⁵个/mL铺设24孔细胞培养板，每孔加入500μL的RPMI 1640培养基，于37℃CO₂培养箱中培养12h；

(2)更换新的RPMI 1640培养基，以病毒感染复数为1的高致病性PRRSV HN07-1毒株于4℃孵育PAMs 1h；弃细胞上清，用PBS缓冲液洗细胞三次，洗去未结合细胞的病毒粒子；

(3)向细胞培养板孔中分别加入无细胞毒性的胰蛋白酶或弹性蛋白酶，室温处理15min；弃细胞上清，用PBS缓冲液洗细胞三次，向细胞培养板孔中加入500μL的RPMI 1640培养基，37℃培养12h。

4.如权利要求2所述提高PRRSV体外培养感染量的方法，其特征在于，所述DMEM培养基含10％(v/v)热灭活胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素。

5.如权利要求3所述提高PRRSV体外培养感染量的方法，其特征在于，所述RPMI 1640培养基含10％(v/v)热灭活胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素。

6.一种如权利要求1所述提高PRRSV体外培养感染量的方法在提高猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA含量中的应用。

7.一种如权利要求1所述提高PRRSV体外培养感染量的方法在提高猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白表达含量中的应用。

8.一种如权利要求1所述提高PRRSV体外培养感染量的方法在提高猪繁殖与呼吸综合征病毒滴度中的应用。

9.一种如权利要求1所述提高PRRSV体外培养感染量的方法在猪繁殖与呼吸综合征疫苗生产中的应用。