[发明专利]一种体外诱导免疫抑制性髓系抑制细胞及其制备和应用

说明书

本发明涉及一种体外诱导免疫抑制性髓系抑制细胞的制备获取方法，属于细胞生物学及临床应用领域；本发明具体公开了一种免疫抑制性髓系抑制细胞(Myeloid‑derived suppressor cells，MDSCs)，来源于健康捐献个体，通过体外药物诱导刺激产生免疫抑制性，及其制备提纯方法；本发明发现体外诱导免疫抑制性髓系抑制细胞在体外能有效抑制CD4⁺T细胞增殖效应，减轻角膜移植后排斥反应，并且有效抑制病理性新生血管的生长，本发明的上述应用可以制备有效地治疗角膜移植后排斥及有效抑制病理性新生血管生成的生物制剂。

技术领域

本发明涉及一种体外诱导免疫抑制性髓系抑制细胞的制备获取方法，属于细胞生物学及临床应用领域。

背景技术

髓样抑制细胞(Myeloid-Derived Suppressor Cells，MDSC)是一种骨髓来源细胞形态幼稚的髓系祖细胞，在一定环境下可以向下游分化为成熟的粒细胞、巨噬细胞或树突状细胞。在小鼠体内，MDSC特征性共表达表面分子髓系分化抗原(Myeloid-cell LineageDifferentiation Antigen-1，Gr-1)和CD11b(即αM-integrin)。根据MDSC中Gr-1的亚群Ly6C及Ly6G的表达可大致分为粒性MDSC(CD11b⁺Gr-1⁺Ly6G^highLy6C^-，PMN-MDSC)和单核性MDSC(CD11b⁺Gr-1⁺Ly6G^-Ly6C^high，M-MDSC)两群(VegliaF,Perego M,GabrilovichD.Myeloid-derived suppressor cells coming of age.Nat Immunol.2018；19(2):108-119.)。

研究报道，在肿瘤和炎症状态下，MDSC可以诱导调节性T细胞(RegulatoryT cell，Treg)分化增殖，影响Treg/Th17平衡，促进M2巨噬细胞极化，增强Arg-1、Nos2和Nox2的表达，通过细胞直接接触和细胞分泌物间接作用，抑制效应性T细胞(CD11b⁺Gr-1⁺Ly6G^-Ly6C^high，M-MDSC)两群(VegliaF,Perego M,Gabrilovich D.Myeloid-derived suppressorcells coming of age.Nat Immunol.2018；19(2):108-119.)。生理状态下正常小鼠骨髓分离的CD11b⁺Gr-1⁺MDSC(MDSC,nMDSC)没有免疫抑制功能，而在病理状态下体内诱导的MDSC，如脓毒血症小鼠及负荷肝癌小鼠骨髓内分选出的CD11b⁺Gr-1⁺MDSC，具有强大的免疫抑制性，可以有效抑制CD4⁺及CD8⁺T细胞增殖，且具有一定的剂量相关性(Yan He,BeibeiWang,Bei Jia,Jieying Guan,Hui Zeng*,Zhiqiang Pan*.Effects of adoptivetransferring different sources of Myeloid Derived Suppressor cells in micecorneal transplant survival.Transplantation 2015；99:2102–2108.)，但体内病理环境诱导具有抑制功能性MDSC有效但存在高风险。