[发明专利]一种用于核酸酶检测的SERS横向流动试纸条及检测方法

说明书

本发明涉及一种用于核酸酶检测的SERS横向流动试纸条及检测方法。所述SERS横向流动试纸条包括底板、样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，反应膜设有检测线和控制线，检测线设置于靠近结合垫一端，控制线设置于靠近吸附垫一端；所述结合垫上包被有拉曼报告分子和检测DNA标记的纳米粒子作为SERS纳米探针，检测线固定有链霉亲和素，控制线固定抗单链DNA抗体。本发明以SERS技术进行定量分析，SERS信号强，无光漂泊，指纹信息丰富，稳定性强，故检测具有更高的灵敏度，与免疫层析技术结合制备成SERS横向流动试纸条，样本需求量低，操作简便，反应快速，结果准确，价格低廉，检出限低，选择性好，易于实现批量生产。

技术领域

本发明涉及一种用于核酸酶检测的SERS横向流动试纸条及检测方法，属于光化学分析技术领域。

背景技术

能够将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断的酶，称为核酸酶。核酸酶属于水解酶，作用于磷酸二酯键的P-O 位置。核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之间的磷酸二酯键的一种核酸。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的。不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶专一性较低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此统称为核酸酶（nuclease）。根据核酸酶作用的位置不同，又可将核酸酶分为核酸外切酶（exonuclease）和核酸内切酶（endonuclease）。

有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶即是一种3′→5′外切酶，水解产物为5′核苷酸；核酸外切酶从5′端开始逐个水解核苷酸，称为5′→3′外切酶，例如：牛脾磷酸二酯酶即是一种5′→3′外切酶，水解产物为3′核苷酸。

随着时代的进步，现代医学生物等领域已经证明了核酸酶在涉及复制、重组、DNA修复、分子克隆、基因分型和作图的生物过程中发挥关键作用，因此，精确分析核酸酶的活性具有重要意义。酶传统检测方法有凝胶电泳、放射性标记、高效液体色谱及酶联免疫吸附测定（ELISA），虽然这些方法通常具有较高的准确度，但此类方法依然存在许多亟待解决的关键问题，如操作繁琐，周期长、需引入放射性物质、仪器昂贵或者需要复杂的修饰过程，难以实现高通量和自动化检测。为此我们需要针对当前酶检测技术进行进一步得改进并使其能够应用到实际生活生产当中。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足之处提供一种简单、快速、灵敏的用于核酸酶检测的SERS横向流动试纸条及检测方法。

为了达成上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于核酸酶检测的SERS横向流动试纸条，所述SERS横向流动试纸条包括底板,以及在所述底板上从左往右依次搭接的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述反应膜设有检测线和控制线，所述检测线设置于靠近结合垫一端，所述控制线设置于靠近吸附垫一端；

所述检测线固定有链霉亲和素，所述控制线固定有抗单链DNA抗体；

所述结合垫滴加有SERS纳米探针，所述SERS纳米探针由拉曼报告分子和检测DNA标记的纳米粒子组成；

所述样品垫滴加有底物DNA和核酸酶的混合液；

所述纳米粒子为金纳米粒子、银纳米粒子、金/银复合纳米粒子中的一种，其粒径为20-100nm，形状为球形、棒状、片状、三角形、纳米花或树枝状；

所述拉曼报告分子为孔雀石绿异硫氰酸酯（MGITC）、4-巯基吡啶、罗丹明B异硫氰酸酯、含巯基或异硫氰酸根的拉曼报告分子中的一种；

所述检测DNA为一端修饰巯基或氨基的单链DNA；