[发明专利]复合磁性微粒、去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种复合磁性微粒，其特征在于，所述复合磁性微粒包括磁性微粒和特异性单抗或多抗；

所述特异性单抗或多抗包括特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗；

所述特异性单抗或多抗偶联于磁性微粒表面。

2.根据权利要求1所述的复合磁性微粒，其特征在于，所述复合磁性微粒包括表面含有羧基的磁性微粒，优选为日本JSR公司生产的货号为Magnosphere^TM MS300/Caboxyl的磁性微粒。

3.一种根据权利要求1或2所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

提供含磁性微粒的溶液，随后加入特异性识别红细胞表面抗原的单抗或多抗和偶联剂，偶联，得到复合磁性微粒。

4.根据权利要求3所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述偶联剂包括戊二醛、硫酸铵、碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)和含有NHS酯的抗体中的至少一种，优选为可溶于水的碳二亚胺；

优选地，所述磁性微粒与单抗或多抗混合偶联质量比为5～15：2.5～7.5。

5.根据权利要求3所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述偶联为震荡偶联；

优选地，所述震荡偶联的反应条件至少满足如下中的至少一个：

震荡偶联的温度为35～40℃、时间为1.5～2.5h、震荡功率为25～35瓦，频率为35-50rpm；

更优选地，所述震荡偶联的反应条件至少满足如下中的至少一个：

震荡偶联的温度为37℃、时间为2h、震荡功率为25～35瓦，频率为30～40rpm。

6.根据权利要求3所述的复合磁性微粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括将复合磁性微粒进行收集的步骤；

优选地，收集包括以下步骤：利用磁铁吸附复合磁性微粒，然后弃上清洗涤沉淀，随后将沉淀悬浮于含有封闭剂的溶液中；

更优选地，所述封闭剂为Sigma公司生产的ProClin^TM300。

7.一种去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(A)、提供外周血或骨髓细胞，加入缓冲液混匀，得到外周血或骨髓细胞悬液；

(B)、向外周血或骨髓细胞悬液中加入权利要求1或2所述的复合磁性微粒混匀，静置，随后取上清，得到去除红细胞后的溶液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(A)中外周血或骨髓细胞与缓冲液的体积比为1:1～2，优选为1:1；

优选地，所述步骤(A)缓冲液包括0.9％生理盐水、MEM或D-Hanks中的一种；优选为PBS溶液；

优选地，所述步骤(B)外周血或骨髓细胞悬液与复合磁性微粒的体积比为2～6:1～4，优选为2:1；

优选地，所述步骤(B)静置的时间为3～8min，优选为5min。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(A)、提供外周血或骨髓细胞，随后将外周血或骨髓细胞与缓冲液以1:1～2的体积比混匀，得到外周血或骨髓细胞悬液；

(B)、以2～6:1～4的体积比向外周血或骨髓细胞悬液中加入权利要求1或2所述的复合磁性微粒混匀，静置3～8min，随后取上清，得到去除红细胞后的溶液；如仍有未除去的红细胞，可重复上述方法；

优选地，所述方法包括以下步骤：

(A)、提供外周血或骨髓细胞，随后将外周血或骨髓细胞与缓冲液以1：1的体积比混匀，得到外周血或骨髓细胞悬液；

(B)、以2:1的体积比向外周血或骨髓细胞悬液中加入权利要求1或2所述的复合磁性微粒混匀，静置5min，随后取上清，得到去除红细胞后的溶液。

10.如权利要求1或2所述的复合磁性微粒、如权利要求7～9任一项所述的去除外周血或骨髓细胞中红细胞的方法在制备单核细胞中的应用。