[发明专利]一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的纳米抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican‑3，GPC3)的纳米抗体及其制备方法，所述纳米抗体具有3个互补决定区：CDR1、CDR2和CDR3，其中，CDR1包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，CDR3包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。本发明的纳米抗体能够通过结合细胞膜表达的GPC3，特异性地识别GPC3高表达的肝癌细胞。该抗体在血清中具有高稳定性，可用于GPC3的功能研究，也可用于肝细胞癌的诊断试剂和治疗药物的开发。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的纳米抗体及其制备方法及应用。

背景技术

肝癌素有“癌症之王”之名，是死亡率高居第三的癌症。中国的肝癌新发病例数及死亡病例数占全球总数的一半以上。肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是肝癌的最主要形式，约占75％。由于肝癌早期症状隐匿以及诊断手段的限制，多数肝癌患者被确诊时已处于肝癌晚期，而晚期肝癌预后差，治疗十分困难。因此，肝癌的早期诊断对于提高肝癌患者的生存期意义重大。而靶向药物由于其靶向性强、副作用小，成为肝癌诊断和治疗最具前景的药物之一。肝癌肿瘤细胞的标志蛋白是靶向药物常用的分子靶标。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3，GPC3)是肝细胞癌的标志蛋白，在肝细胞癌肿瘤细胞中特异性高表达。GPC3是一种通过糖基磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol，GPI)锚定在细胞膜上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖，参与调控个体发育、细胞增殖和分化等过程。正常情况下，GPC3仅在胎儿肝脏中表达，健康成人肝脏中一般无GPC3表达或表达量较低。然而，在多数肝细胞癌患者的肝脏组织中，GPC3呈过量表达现象。研究显示，GPC3作为肝细胞癌标志蛋白的灵敏度为70-94％，特异性为86-100％。因此，GPC3是肝细胞癌靶向药物的良好靶标分子。靶标分子的特异性抗体在靶向药物中发挥靶向作用，将药物特异性的结合至分子靶标，发挥诊断和(或)治疗功能。目前，已有特异性识别GPC3的单克隆抗体的报道，然而鉴于传统抗体稳定性低、制备工艺复杂及成本昂贵等局限性，目前迫切需要开发针对GPC3的新型抗体。