[发明专利]一种免疫细胞及其制剂与应用

说明书

本发明涉及生物细胞技术领域，尤其涉及一种免疫细胞及其制剂与应用，该免疫细胞表达CAR；所述CAR的表达被调控依赖于一段氨基酸序列。本发明提供一种可调控的CAR的设计方案及一种工程化的免疫细胞，将此设计方案设计出的CAR转入T细胞后，T细胞在遇到靶细胞时，CAR的表达才会上升，识别肿瘤表面标记物，行驶杀伤功能，当无靶细胞存在时，CAR的表达会自动下调，从而减少CAR‑T细胞的耗竭，使其在体内行驶功能的时间更持久。

技术领域

本发明涉及生物细胞技术领域，特别是涉及可以调控表达CAR的免疫细胞，优化CAR的设计，及该免疫细胞的制剂与应用。

背景技术

2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。免疫细胞治疗是采集患者外周静脉血，在GMP实验室内分离外周血单个核细胞，在多种细胞因子诱导下，大量扩增出具有高效抗瘤活性的免疫效应细胞，再通过静脉、皮内注射、介入等回输到患者体内，达到增强患者免疫功能和杀伤肿瘤细胞的目的，常用的免疫细胞治疗手段包括CIK、DC、TIL、DC+CIK 细胞等。

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)通常是scFv(single-chain variablefragment)，跨膜区以及胞内共刺激信号区域组成。通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体(CAR)。CARs的胞外段scFv可识别一个特异的抗原，随后通过胞内结构域转导该信号，引起T细胞的活化、增殖、细胞溶解毒性和分泌细胞因子，进而清除靶细胞。

CAR-T细胞治疗技术由于其治疗优势治疗更精准、多靶向更精准，杀瘤范围更广、更持久越来越受到人们的重视，其在血液瘤上也取得了令人瞩目的临床效果。

然而CAR-T治疗还存在一些问题，CAR-T细胞治疗实体瘤的效果一直都不如血液瘤，其一个重要的原因是CAR-T细胞的耗竭导致其在体内存活时间短且杀伤力低。 CAR的表达多少会影响CAR-T细胞的激活程度，当T细胞表面的CAR的表达增高时，CAR的胞外区scFv之间形成的聚体结构概率大大增加，聚体的形成会使T细胞激活增加，从而加速耗竭。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种免疫细胞，其具有年轻、持久性强、特异性好、副作用小的特性。

一种免疫细胞，表达CAR；CAR的表达被调控依赖于一段氨基酸序列。

有益效果：本发明提供一种可调控的CAR的设计方案及一种工程化的免疫细胞，将此设计方案设计出的CAR转入T细胞后，T细胞在遇到靶细胞时，CAR的表达才会上升，识别肿瘤表面标记物，行驶杀伤功能，当无靶细胞存在时，CAR的表达会自动下调，从而减少CAR-T细胞的耗竭，使其在体内行驶功能的时间更持久。

在其中一个实施例中，免疫细胞为外周血T、TIL、NK、NKT、gamma-deltaT中的一种或几种。

在其中一个实施例中，免疫细胞是可以靶向任何靶点的第一代CAR、第二代CAR、第三代CAR、第四代CAR或者双CAR。

在其中一个实施例中，所述免疫细胞是在CAR的序列中添加一段氨基酸序列，所述氨基酸序列为：NCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQL。

在其中一个实施例中，所述氨基酸序列在CAR的跨膜区域前面或者跨膜区域后面。

本发明还提供了一种制剂，该制剂含有上述任一项所述的免疫细胞。

在其中一个实施例中，所述制剂为药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明免疫细胞可用于制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。

此CAR的设计方法是在CAR的跨膜区前面或者后面加入一段氨基酸序列。如下8种CAR的结构：