[发明专利]一种快速检测抗PD-L1单克隆抗体浓度的方法

说明书

本发明公开了一种快速检测抗PD‑L1单克隆抗体浓度的方法，它是采用全自动分子发光免疫分析仪检测，具体包括如下步骤：a、标准溶液的制备；b、分别将待测样本、系列浓度的标准溶液加入AML仪中，与纳米磁珠偶联PD‑L1蛋白和异鲁米诺衍生物标记的Goat anti‑Human IgG(示踪物)混合反应，加入系统液洗涤后加入激发液，测定发光峰值；c、计算待测样本中的抗PD‑L1单克隆抗体的浓度。本发明检测方法，将磁珠作为固相载体，同时采用的异鲁米诺衍生物标记抗体，加快了抗原抗体的反应，使抗PD‑L1单克隆抗体浓度检测的结果准确的同时，提高了自动化程度、检测速度和灵敏度，具有非常重要的意义。

技术领域

本发明具体涉及一种快速检测抗PD-L1单克隆抗体浓度的方法。

背景技术

抗PD-L1单克隆抗体药物，是目前肿瘤治疗药物中的明星药物，对多种肿瘤如黑色素瘤、肺癌、尿路上皮癌、头颈部鳞癌等治疗效果显著，与既往的传统治疗如化疗、放疗及靶向治疗等直接杀伤肿瘤细胞不同，抗PD-L1单抗是通过作用于免疫系统间接杀伤肿瘤细胞。与其他抗肿瘤药物一样，抗PD-L1单抗使用过程中也会伴随发生与其作用机制相关的不良反应，称为免疫相关不良反应(irAE)。与化疗所致的不良事件相比，irAE可能具有迟发、持续时间长和累及器官多的特点。.

近年来生物技术药物，尤其是抗体药发展越来越迅速。其中对于生物技术药物，体内药物分析主要以免疫分析方法为主。对于抗PD-L1单克隆抗体药物，我们常用的分析方法主要是ELISA和MSD。这两种方法主要的缺点就是自动化程度低、人工成本高且耗时长，完成一个实验，除需要提前包被过夜，完成后续的实验操作还需要5-8个小时。开发自动化程度高、检测快速的定量检测抗PD-L1抗体的检测方法具有非常重要的意义。

全自动免疫分析方法，通过全自动分子发光免疫分析仪检测，其中化学发光反应分两种类型：第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的敏感性，第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物，直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量，利用全自动分子发光免疫分析仪检测时间短只需要5-20分钟就能出结果，但并不是任何化学反应动能产生化学发光反应，因此，如果测量条件适当，化学发光分析会有足够的选择性。

目前未见抗PD-L1抗体的全自动分析方法免疫分析方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种快速检测抗PD-L1单克隆抗体浓度的方法，它是采用全自动分子发光免疫分析仪检测，具体包括如下步骤：

a、标准溶液的制备：取抗PD-L1单克隆抗体标准品，用空白样本溶液配制成系列浓度的标准溶液；

b、分别将待测样本、系列浓度的标准溶液加入AML仪中，与纳米磁珠偶联PD-L1蛋白溶液和示踪物溶液混合反应15～20min，再加入系统液洗涤，去掉洗涤后的系统液后加入激发液混匀，测定发光值；

c、以标准溶液的浓度和发光值建立四参数拟合的标准曲线，根据标准曲线和待测样本发光值计算待测样本中的抗PD-L1单克隆抗体的浓度。

进一步地，步骤a所述系列浓度标准溶液中抗PD-L1单克隆抗体浓度为0.2～51.2ng/mL。

进一步地，步骤b所述待测样本或系列浓度的标准溶液，与纳米磁珠偶联PD-L1蛋白溶液、示踪物溶液、系统液、激发液A和激发液B的体积比为4～6：1～3：10～20：60～70：10～30，优选5：2：15：65：20。

更进一步地，所述待测样本包括但不限于血清、血浆或需要用蛋白缓冲液配制的样本。

更进一步地，所述纳米磁珠偶联PD-L1蛋白溶液是纳米磁珠偶联PD-L1蛋白原液用1％牛血清白蛋白稀释液稀释10倍制备而成的溶液；所述示踪物溶液是异鲁米诺衍生物标记的Goat Anti-Human IgG原液用1％牛血清蛋白稀释液稀释2000倍制备而成的溶液。