[发明专利]一种头孢菌素C的发酵方法

说明书

本发明公开了一种头孢菌素C的发酵方法，具体步骤包括：采用顶头孢霉菌依次制备一级种子、二级种子、三级种子，然后将得到的三级种子进行发酵的同时在培养基中流加玉米浆，制得发酵液，然后将发酵液分离纯化，制得到头孢菌素C。本发明采用的玉米浆为湿磨法生产玉米淀粉的副产物，玉米浆中含有大量的亚硫酸、多肽、多糖、蛋白质及多种氨基酸如精氨酸、缬氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸以及半胱氨酸等，这些成分均是发酵头孢菌素C的前体成分，在发酵过程中流加玉米浆能为菌体生长代谢提供全面的营养成分，从而达到提高头孢菌素C的发酵水平和头孢菌素C的发酵产量、降低发酵成本，具有优秀的产业化前景。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及一种头孢菌素C的发酵方法。

背景技术

头孢菌素C由顶头孢霉(Cephalosporiumacremonuim)产生，是顶头孢霉菌的初级代谢在特定条件下的继续与发展的产物，是继青霉素之后又一重要的β-内酰胺类抗生素。目前提高头孢菌素C生产水平的主要途径为：一是改变菌种原有性能，进行诱变筛选或基因工程技术获得高产菌种，二是优化发酵工艺。

目前国外头孢菌素C发酵水平明显高于国内，因此，提供一种新的发酵头孢菌素C的发酵方法以提高发酵水平，从而提高头孢菌素C产量、降低发酵成本是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种头孢菌素C的发酵方法；

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

头孢菌素C的发酵方法，包括以下步骤：

(1)制备一级种子

取顶头孢霉菌置于茄子瓶斜面，制备质量体积比为20-25％的菌悬液，按照1％-2％的接种量接种至一级种子培养基中，温度为27-29℃的条件下培养50h，得到一级种子；

(2)制备二级种子

取步骤(1)所得一级种子，按照8％-10％的接种量接种于二级种子培养基中，在PH为6.5-7.4、温度为27-29℃的条件下培养45-50h，得到二级种子；

(3)制备三级种子

取步骤(2)所得二级种子，按照8％-10％的接种量接种于三级种子培养基中，在PH为6.5-7.4、温度为27-29℃的条件下培养45-50h，得到三级种子；

(4)发酵

取步骤(3)所得三级种子，按照25-33％的接种量接种至发酵培养基中培养，在发酵过程发酵培养40-100h后开始流加玉米浆，发酵130h后即得发酵液；

(5)将步骤(4)依次经过陶瓷膜过滤发酵液流量控制在15-30m³/h、纳滤浓缩流量控制在60-80m³/h、树脂吸附流量控制在50-80m³/h、解析分离纯化流量控制在30-60m³/h，即得所述头孢菌素C。

与现有技术相比本发明的有益技术效果在于：本发明采用的玉米浆为湿磨法生产玉米淀粉的副产物，玉米浆中含有大量的亚硫酸、多肽、多糖、蛋白质及多种氨基酸如精氨酸、缬氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸以及半胱氨酸等，这些成分均是发酵头孢菌素C的前体成分，在发酵过程中流加玉米浆能为菌体生长代谢提供全面的营养成分，从而达到提高头孢菌素C的发酵水平和头孢菌素C的发酵产量、降低发酵成本，具有优秀的产业化前景。

进一步，上述步骤(1)中，顶头孢霉菌的保藏编号为ATCC36225。