[发明专利]一种过表达PD-L1基因的间充质干细胞株及其构建方法和应用

说明书

本发明实施例公开了一种过表达PD‑L1基因的间充质干细胞株及其构建方法和应用，属于生物医学技术领域。所述方法包括以下步骤：1)构建携带有PD‑L1基因的重组慢病毒；2)将所述携带有PD‑L1基因的重组慢病毒转染间充质干细胞，经嘌呤霉素筛选，得到过表达PD‑L1基因的间充质干细胞株。本发明的过表达PD‑L1基因的间充质干细胞株静脉注射类风湿性关节炎小鼠模型后，能够显著减轻类风湿性关节炎症状，降低关节损伤程度，并调节炎性因子的表达，抑制炎症反应，在治疗类风湿性关节炎疾病中有显著性疗效。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种基因工程改造的过表达细胞程序性死亡配体1(PD-L1)基因的间充质干细胞株及其构建方法、及该过表达PD-L1基因的间充质干细胞株在治疗类风湿性关节炎中的应用。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节软骨病变、滑膜细胞增生为特征的系统性、炎性自身免疫性疾病。患病关节及其周围组织呈现进行性破坏，并致使受损关节发生功能障碍。类风湿性关节炎是一种常见而折磨人的免疫性疾病，发生原因是机体的免疫系统紊乱，把自身组织当成了敌人进行攻击，导致关节疼痛、肿胀和破坏，并损伤皮肤、眼、肺等器官。类风湿性关节炎被称之为不死的癌症，当前治疗手段还不能根治该疾病。随着生物技术的发展和完善，干细胞治疗已经为治疗类风湿性关节炎提供了有效的治疗手段。

间充质干细胞(MSCs)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，医学界称为“万用细胞”。同时也表现出抗炎和免疫抑制的特性，从而对炎症性和自身免疫性疾病有潜在的治疗作用。间充质干细胞这些独特的性质赋予它们治疗风湿性疾病的潜能。

干细胞治疗就是提取人体组织中特定的干细胞，在一定的诱导条件下，让这些细胞分化成我们所需的细胞，植入人体，干细胞就会在人体受损部位工作起来，治疗疾病。目前，干细胞治疗在免疫性相关疾病中的作用已经受到了人们的广泛关注。在利用干细胞治疗类风湿性关节炎研究中，已有研究证明间充质干细胞可以抑制T细胞增殖活化，调节相关免疫细胞及因子，缓解炎症反应。同时，间充质干细胞在体外可诱导分化为骨、软骨、脂肪、腱、肌肉等细胞，可聚集至关节病变部位，对关节组织进行损伤修复。

细胞程序性死亡配体1(PD-L1)是大小为40kDa的I型跨膜蛋白。正常情形下免疫系统会对聚集在淋巴结或脾脏的外来抗原产生反应，诱导具有抗原特异性的T细胞产生。而表达在细胞上的PD-L1可以通过与细胞程序化死亡受体-1(PD-1)结合，阻断T细胞受体信号来抑制其免疫效应，对维持外周免疫耐受和调节T细胞活化具有重要作用。

目前，国内外尚无将MSC细胞与PD-L1结合来治疗关节炎的报道。而现阶段传统治疗关节炎相关疾病的手段及传统药物，虽然其能缓解类风湿性关节炎的症状，但治疗效果不明显，且病情复发率较高，副作用较大。因此，将MSC细胞与PD-L1有效结合，使MSC细胞更大程度的抑制T细胞增殖和活化，进而调节免疫效应与炎症反应。此治疗方法有望成为治疗类风湿性关节炎的新手段，能够有效改善类风湿关节炎的症状，降低不良反应率，安全性好，并有助于患者回归正常生活，改善患者的生活质量。

发明内容

为此，为了克服现有技术的上述不足，本发明的目的在于提供一种过表达PD-L1基因的间充质干细胞株及其构建方法和应用，包括对间充质干细胞进行基因工程改造，建立稳定过表达PD-L1基因的间充质干细胞株；利用慢病毒质粒对干细胞基因转导和基因修饰来制备上述细胞株的方法；以及该细胞株在治疗类风湿性关节炎中的应用。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，本发明实施例提供一种过表达PD-L1基因的间充质干细胞株的构建方法，包括以下步骤：

1)构建携带有PD-L1基因的重组慢病毒；