[发明专利]一种酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料，其特征在于，纳米复合材料包括可被透明质酸酶降解的透明质酸钠盐HA、光敏剂二氢卟吩e6 Ce6、二硫化钼纳米片MoS₂ NSs。

2.根据权利要求1所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：制备单层MoS₂ NSs水分散液

向Schlenk管中加入MoS₂粉末，接着在氩气保护下向Schlenk管中注入正丁基锂己烷溶液，随后将Schlenk管在冰浴中超声，超声结束后静置，然后在氩气保护下吸走残余的正丁基锂己烷溶液，之后向Schlenk管中注入除氧水，再超声；

随后将Schlenk管内的液体转移至烧杯，并使用乙醇冲洗Schlenk管内壁，合并洗涤液体至烧杯，得到的混合液在12000rpm下离心10min，弃去上清液，将沉淀物重新用乙醇分散，再离心；将离心得到的沉淀分散在超纯水中，通过超声分散后，在9000rpm的转速下离心30min，保留上清液，弃去沉淀；将所得上清液在15000rpm的转速下离心1h，弃去上清液，得到的沉淀分散于超纯水中，得到单层MoS₂ NSs水分散液；

步骤2：制备HA与Ce6的偶联物，即HA-Ce6

称取HA、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC、N-羟基琥珀酰亚胺NHS，用PBS缓冲液溶解并混匀，得到HA溶液；接着将无水乙二胺，用PBS缓冲液溶解，并将其加入到HA溶液中，搅拌得到混合液，再将混合液置于去离子水中透析纯化，得到氨基化的透明质酸A-HA；

称取Ce6、EDC、NHS，用二甲亚砜溶解并混匀，得到Ce6的二甲亚砜溶液；

取A-HA水溶液，加入到N,N-二甲基甲酰胺中，超声混匀后，将其加入至Ce6的二甲亚砜溶液；然后搅拌，待反应完成后，将混合液置于去离子水中透析纯化，得到HA-Ce6；

步骤3：制备MHC NSs

将HA-Ce6溶解于有机溶剂中，再超声，超声后加入MoS₂ NSs水分散液，再搅拌；搅拌完成得到混合液，将混合液加入到PBS缓冲液中，再超声；将超声后的混合液在去离子水中透析，随后进行离心纯化，得到的沉淀为纳米复合材料MoS₂@HA-Ce6，即MHC NSs。

3.根据权利要求2所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，MoS₂ NSs为单层纳米片，横向尺寸约20～600nm，纵向尺寸在2nm以内。

4.根据权利要求2所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，HA为透明质酸钠盐，HA与Ce6的质量比为1:0.5。

5.根据权利要求2所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，PBS缓冲液的浓度为0.01M，pH＝7.4。

6.根据权利要求2所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，MoS₂ NSs与Ce6的质量比为1:1～10。

7.根据权利要求2所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，有机溶剂为二甲亚砜，PBS缓冲液与混合液的体积比为2:1。

8.根据权利要求2所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤2、3的制备过程中，原料均在室温下搅拌，搅拌时间为12h；所述步骤3的制备过程中，离心纯化的条件为15000rpm，时间为15min。

9.根据权利要求2所述的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤2和3中，透析的具体步骤为，将混合液装入透析袋，置于去离子水中透析48h，每隔6-8h更换去离子水。

10.根据权利要求2-9任一所述的制备方法制得的酶响应性检测/抗菌双功能纳米复合材料的应用，其特征在于，当细菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA时，复合纳米材料MHC NSs的作用浓度为5～100μg/mL，作用浓度指MoS₂的质量浓度。