[发明专利]一种葫芦巴黄色素的提取方法

权利要求书

1.一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)称取脱胶葫芦巴渣适量，粉碎过筛，加入水配制成浓度为20～60％的葫芦巴渣水溶液，静置时长10～24小时，备用；

(2)将步骤(1)所述的葫芦巴渣溶液在无菌条件下接种枯草芽孢杆菌后进行恒温发酵培养；

(3)将步骤(2)所得发酵培养液加入纤维素酶进行酶解，滤过，滤液浓缩，真空干燥，得干浸膏备用；

(4)将步骤(3)所得干浸膏加入适量的醇溶液进行水浴浸提，滤过回收醇，合并滤液，滤液用大孔树脂吸附洗脱，所得洗脱液浓缩，喷雾干燥得葫芦巴黄色素。

2.根据权利要求1所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于步骤(1)所述葫芦巴渣粉碎过筛为用植物粉碎机将葫芦巴渣进行粉碎，过40～120目筛，优选为100目筛；所述葫芦巴渣水溶液浓度为30～50％，优选为40％，并用醋酸钠-醋酸缓冲液调节葫芦巴渣水溶液的pH值至3～5，优选pH值至4；所述静置为在常温下静置，时长18小时。

3.根据权利要求1所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于步骤(2)所述枯草芽孢杆菌的接种量为5％～30％，优选为15％。

4.根据权利要求1所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于步骤(2)所述恒温发酵培养为将接种后的葫芦巴渣溶液置于温度为45℃～90℃的恒温培养箱中，发酵培养24～72小时；优选地，恒温箱温度为60℃；发酵培养48小时。

5.根据权利要求1所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于步骤(3)所述纤维素酶的加入量为15～40u/g，优选为25u/g，酶解温度为50℃，酶解24小时。

6.根据权利要求1所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于步骤(4)所述干浸膏加入的醇为乙醇，优选为60％～90％的乙醇，更优选为80％的乙醇；加入醇的量为料液比1∶10～30，更优选地料液比1∶20；所述水浴浸提为水浴温度为80℃，浸提0.5～2小时，更优选地，浸提1小时。

7.根据权利要求1所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于步骤(4)所述大孔树脂为D-101型，所述吸附洗脱为将浸提后的滤液上大孔树脂柱，上柱流速为1.2ml/min，完成后静置30分钟，再用蒸馏水洗10～40分钟，优选地，水洗20分钟；最后以4～6倍柱体积量的乙醇解吸，并收集洗脱液，浓缩，喷雾干燥，即得本发明黄色素。

8.根据权利要求7所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于所述解吸选用80％的乙醇以6倍柱体积量解吸，流速为1.5ml/min，解吸时间为60分钟。

9.根据权利要求1所述的一种葫芦巴黄色素的提取方法，其特征在于其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)称取脱胶葫芦巴渣适量，粉碎过100筛，加入水配制成浓度为40％的葫芦巴渣水溶液，并用醋酸钠-醋酸缓冲液调节pH值至4.0，在常温下静置18小时，备用；

(2)将步骤(1)所述的葫芦巴渣溶液在无菌条件下接种枯草芽孢杆菌后置于温度为60℃的恒温培养箱中发酵培养48小时；其中枯草芽孢杆菌的接种量为15％；

(3)将步骤(2)所得发酵培养液加入25u/g的纤维素酶在温度为50℃的条件下进行酶解24小时，滤过，滤液浓缩，真空干燥，得干浸膏备用；

(4)将步骤(3)所得干浸膏加入料液比为1∶20的80％乙醇混合均匀，置于温度为80℃的水浴锅中加水浸提1小时；滤过，回收乙醇，合并滤液，滤液用D-101型大孔树脂吸附洗脱，上柱流速为1.2ml/min，完成后静置30分钟，再用蒸馏水洗脱20分钟；最后选用80％的乙醇以6倍柱体积量解吸，洗脱液流速为1.5ml/min，解吸60分钟，所得洗脱液浓缩，喷雾干燥，即得本发明葫芦巴黄色素。