[发明专利]一种高频菜心离体组织培养方法

权利要求书

1.一种高频菜心离体组织培养方法，其特征在于包含如下步骤：

（1）将菜心种子经表面消毒后置于播种培养基上进行培养；

（2）选取步骤（1）培养苗龄为3 d的无菌苗，在生长点上方平稳切下带柄子叶作为外植体，垂直插入分化培养基中进行分化培养，获得不定芽；

（3）将步骤（2）获得的不定芽转至生根培养基中进行生根培养，获得组培苗；

（4）将步骤（3）获得的组培苗开瓶炼苗，后续常规管理；

步骤（1）中所述的播种培养基为1/2 MS培养基+10 g/L蔗糖+6 g/L琼脂，pH=5.9；

步骤（2）中所述的分化培养基包含如下按终浓度计的组分：

MS+0.3 mg/L NAA+5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+12 g/L琼脂+2 mg/L AgNO₃，pH=5.8；

步骤（3）中所述的生根培养基包含如下按终浓度计的组分：

MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+12 g/L琼脂+5mg/L AgNO₃，pH=5.8；

步骤（2）中所述的带柄子叶的子叶柄的长度为0.5cm；

步骤（1）中所述的菜心的品种为“油绿501”、增城一号、60天甜菜心或碧清甜菜心。

2.根据权利要求1所述的高频菜心离体组织培养方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的表面消毒的具体操作为：

选取籽粒饱满的菜心种子放入离心管中，依次用无菌水冲洗2遍、体积分数为75%的乙醇溶液浸泡2 min、无菌水冲洗2遍、质量分数为7.5%的NaClO浸泡10 min，最后用无菌水冲洗三次并吸干水分。

3.根据权利要求1所述的高频菜心离体组织培养方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的分化培养的时间为40d。

4.根据权利要求1所述的高频菜心离体组织培养方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的不定芽的长度为1.0~2.0cm。

5.根据权利要求1所述的高频菜心离体组织培养方法，其特征在于：

步骤（4）中所述的炼苗的方式为：选择不定根生长健壮的组培苗，洗去根上所有培养基，转移至含有泥炭和蛭石的混合基质中，保鲜袋套袋5~10天，后续常规管理。

6.根据权利要求5所述的高频菜心离体组织培养方法，其特征在于：

所述的泥炭和蛭石的质量比为1:1。

7.根据权利要求1所述的高频菜心离体组织培养方法，其特征在于：

步骤（1）、（2）（3）、（4）中组织培养的环境条件为25 ℃、16 h光照/8 h黑暗、光照使用110 μmol/m²s¹的白色LED灯。