[发明专利]莫奈太尔砜的半抗原、人工抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种莫奈太尔砜的半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。所述莫奈太尔砜半抗原的结构式如式I所示，可按照下述方法制备：在冰醋酸中，采用氧化氢氧氧化对三氟甲硫基苯甲酸即得。本发明提供了莫奈太尔砜半抗原及人工抗原，为高灵敏度抗莫奈太尔砜抗体的制备奠定基础；最终，筛选获得性质最优抗体，效价最高可达4×10⁴，灵敏度为2.6μg/L。本发明所提供的莫奈太尔砜半抗原及人工抗原的合成方法简单高效，所需化学试剂价格低廉，获得的抗体灵敏度高，完全可用于免疫分析中，在兽药残留检测中具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种莫奈太尔砜的半抗原、人工抗原及其制备方法与应用，属于食品安全检测领域。

背景技术

莫奈太尔(Monepantel)是一种新合成的氨基乙腈衍生物类抗虫药，对治疗和控制绵羊胃肠道中成虫期的线虫，包括捻转血矛线虫、环束背带线虫、蛇形毛圆线虫、艾氏毛圆线虫和短古柏线虫等具有高活性，并且对市售的广谱类抗寄生虫药的耐药菌株有效。莫奈太尔具有快速、高效和渗透性神经肌肉效应，通过引起体壁肌肉过度收缩导致咽前部麻痹、痉挛性收缩并最终死亡，可以有效杀灭耐受其他类别药物的线虫。欧盟394/2013规定，莫奈太尔的标志残留物为莫奈太尔砜，其在羊奶中的最大残留限量为0.17mg/kg。

目前报到的用于莫奈太尔砜的测定方法主要为液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)法，其他方法较为缺乏。仪器分析方法虽然灵敏度高、特异性强，但是需要复杂的前处理过程和专业的操作人员，并且仪器昂贵，不适用于大量样品的快速筛查。免疫分析方法在抗原抗体特异性识别的基础上具有特异性强、灵敏度高、成本低、操作简便以及适用于大批量样品的同时检测等优点，弥补了仪器检测的不足。因此，建立免疫学检测方法十分必要。

半抗原的分子设计与抗原合成是获得高特异性和亲和力抗体的关键性步骤。根据半抗原的活性基团，选择相应的生物偶联方法，将半抗原和载体蛋白偶联，获得人工抗原，免疫动物获得抗体，为建立莫奈太尔砜的免疫分析方法奠定基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种莫奈太尔砜半抗原及人工抗原，所制备的产品用于莫奈太尔砜免疫分析方法的研究，为今后的研究提供必需的人工抗原。

本发明所提供的莫奈太尔砜半抗原，其结构式如式Ⅰ所示：

所述莫奈太尔砜半抗原可按照下述制备方法制备：

在冰醋酸中，采用氧化氢氧氧化对三氟甲硫基苯甲酸即得。

具体地，所述对三氟甲硫基苯甲酸、所述冰醋酸与所述过氧化氢的配比为100mg：10～20mL：20～30mL；

所述反应的温度为20～25℃，所述反应的时间为20～24h；

所述反应结束后，采用纯水稀释后用二氯甲烷萃取，萃取液旋干后用纯水洗涤，洗涤后经抽滤得到白色固体，即为所述莫奈太尔砜半抗原。

本发明还提供了一种莫奈太尔砜人工抗原，由所述莫奈太尔砜半抗原与载体蛋白偶联后得到；

所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白和钥孔血蓝蛋白中任一种。

所述莫奈太尔砜半抗原与所述载体蛋白的偶联摩尔比为5～30：1，优选8.8：1；

所述莫奈太尔砜人工抗原可以作为免疫原也可以作为包被原。

可采用活泼酯法将所述载体蛋白偶联于所述半抗原的羧基碳上得到所述莫奈太尔砜人工抗原，具体步骤为：将所述莫奈太尔砜半抗原、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌过夜，得到A液；取所述载体蛋白溶于碳酸盐缓冲液中，得到B液；逐滴将所述A液滴入所述B液中，室温搅拌反应过夜，得到偶联物的混合液；混合液在PBS中透析三天，得到所述莫奈太尔砜人工抗原。