[发明专利]一种肽、肽修饰的DBM支架及其制备方法和应用

说明书

本发明具体涉及一种肽、肽修饰的DBM支架及其制备方法和应用，属于骨修复材料技术领域，所述肽为CBD‑LNα4‑cRGD肽，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，用所述肽修饰DBM支架，其制备方法为：将CBD‑LNα4‑cRGD肽溶于含有BSA的PBS缓冲液中，得到CBD‑LNα4‑cRGD肽溶液，将无菌DBM支架浸没于肽溶液中，静置、漂洗、干燥。本发明的DBM支架能促进EPCs的粘附，同时提高血管生成和H型内皮细胞增殖的能力，实现骨缺损修复中血管生成和骨再生的有效耦联，为骨缺损修复的治疗提供了新的策略。

技术领域

本发明属于骨修复材料技术领域，具体涉及一种肽、肽修饰的DBM支架及其制备方法和应用。

背景技术

节段性骨缺损常常发生在创伤、骨感染和骨肿瘤截骨术后的病人。节段性骨缺损的修复是骨科临床面临的重大难题，其关键在于难以获取足量的高活性骨修复材料。自体骨移植的“金标准”治疗策略存在明显的局限性和不足，寻找骨替代材料就显得格外重要。理想的骨替代材料需要具有快速的血管化能力和强大的骨诱导生物活性。目前，骨支架材料中最大的缺陷就是血管化不足，因而往往出现移植骨吸收，成骨不全等并发症。

选择性细胞滞留技术(SCR技术)是一项新型有效的组织工程技术，旨在通过机械过滤和生物吸附的原理，在术中获得患者骨髓液后，随即利用干细胞富集器将骨髓反复流经疏松多孔的支架材料，从而在术中快速创建一个包含骨髓间充质干细胞(marrow stemcell，MSCs)、血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)和相关细胞因子的微环境，实时获得高生物活性的“自体人工骨”。骨髓中含有大量有核细胞和细胞因子，包括骨髓间充质干细胞、造血干细胞、单核巨噬细胞等，这些细胞和因子在骨缺损修复治疗过程中发挥着关键作用。由此可见，滞留足够的细胞和细胞因子是SCR技术进行骨修复的必要条件。应用于SCR技术的支架材料需具备一定的条件，包括其多孔状的立体结构、良好的生物相容性、基本的骨传导性及诱导性等。脱钙骨基质(demineralizedbone matrix，DBM)即是一种运用在SCR技术中的常用支架材料，是严格按照规范流程处理的同种异体骨，呈海绵状多孔立体结构，主要成分为胶原和少量细胞因子，具备较好的生物相容性和成骨诱导能力，是目前应用于临床的骨组织工程支架材料。然而由于表面电荷相斥、粘附位点较少等原因，其与细胞粘附的能力还有待提高，故有研究将通过在其表面修饰正电荷、减小的孔径和增加额外粘附位点等方式，来进一步提高其自身的成骨诱导能力和与细胞的粘附能力。此外，当前研究主要着眼于MSCs的粘附、迁移、增殖和分化，而对EPCs的重要性不够重视，导致很多材料在实际运用中效果不佳。

发明内容

有鉴于此，本发明目的之一在于提供一种肽。本发明目的之二在于提供一种肽在骨修复中的应用。本发明目的之三在于提供一种修饰的DBM支架。本发明目的之四在于提供一种肽修饰的DBM支架的制备方法。本发明目的之五在于提供一种肽修饰的DBM支架作为骨修复材料中的应用。为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种肽，所述肽为CBD-LNα4-cRGD肽，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2、一种肽在骨修复中的应用。

3、一种肽修饰的DBM支架，所述DBM支架上负载有肽，所述肽为CBD-LNα4-cRGD肽，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4、一种肽修饰的DBM支架制备方法，所述方法为：将CBD-LNα4-cRGD肽溶于含有BSA的PBS缓冲液中，得到CBD-LNα4-cRGD肽溶液，将无菌DBM支架浸没于肽溶液中，静置、漂洗、干燥。

作为优选技术方案之一，所述PBS缓冲液中BSA的质量分数为1-2％。

作为优选技术方案之一，所述静置条件为4℃下6h。

作为优选技术方案之一，所述漂洗具体为PBS缓冲液漂洗2-3次。