[发明专利]一种检测猪PRKAG3基因表达量的方法及其用途

说明书

本发明提供一种检测猪PRKAG3基因表达量的方法及其用途，属于基因检测技术领域，包括提取待测样本猪细胞总RNA并进行cDNA合成，以cDNA为模板对PRKAG3基因和内参基因进行荧光定量PCR扩增，采用双标准曲线法分析PRKAG3基因的相对表达量，其中，PRKAG3基因的引物对包括上游引物PR‑F：ACTTGGCAGACGACGTCTACAT；下游引物PR‑R：CTGAGGTTCAAGTCATCA。本发明提供的一种检测猪PRKAG3基因表达量的方法及其用途具有特异性强、准确度高、重复性好、操作简单、成本较低的优点。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种检测猪PRKAG3基因表达量的方法及其用途。

背景技术

一磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)是一种能被一磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激酶，参与体内营养代谢调节，在糖代谢中起着非常重要的作用。在小鼠上的研究表明，激活AMPK可通过磷酸化作用抑制糖原合成酶活性，降低糖原的合成速率，并可导致葡萄糖转运子4(GLUT-4)从细胞内移位到细胞浆膜上，促进肌肉对葡萄糖的吸收，从而提高骨骼肌中糖原含量，进而可能影响肉质。AMPK由催化亚基α、调节亚基β和γ构成，α和β亚基分别有2种同工型，γ亚基有γ1、γ2、和γ3 3种同工型。PRKAG3(protein kinase adenosinemonophosphate-activatedγ3-subunit)基因是编码AMPKγ3亚基的基因，只特异性在骨骼肌中表达，研究发现PRKAG3基因是一个影响肉质性状的主效基因。因而检测猪PRKAG3基因表达量对于研究猪肉品质具有重要影响。

目前有多种双链DNA结合染料可用于实时荧光定量PCR，包括EB、SYBR GreenⅠ、SYBR Gold、Eva Green等。其中最常用的是SYBR GreenⅠ，这种DNA染料吸收蓝光(λ_max＝497nm)、发射绿光(λ_max＝520nm)，对DNA双链具有高亲和力。当它结合到双链DNA小沟部位时，会发出很强的荧光，在qPCR延伸阶段能够被检测到，具有较强的敏感性，并且不需要因模板不同而进行特别定制，操作简易，相对于荧光探针类来说价格较低，因此被广泛应用。

现有技术如公开号为CN 108192983 A的中国发明专利，公开了一种检测猪PRKAG1基因表达量的方法，包括合成PRKAG1基因特异性引物对A-F和A-R以及内参基因引物对G-F和G-R；提取待测猪的骨骼肌细胞总RNA并反转录成cDNA，得到待测猪的细胞cDNA；以待测猪的细胞cDNA为模板，以S1所述的引物对GF和G-R为引物qPCR扩增猪GAPDH内参基因，以S1所述的引物对A-F和A-R为引物qPCR扩增猪PRKAG1基因；检测S3中qPCR的结果，计算表达量。该发明通过设计PRKAG1基因特异性引物对，参考内参引物GAPDH的qPCR扩增，以及对qPCR结果的相对定量分析，准确、快速地分析了该基因在实验组和对照组中的表达情况。该发明还提供了一种上述方法的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性强、准确度高、重复性好、操作简单、成本较低的检测猪PRKAG3基因表达量的方法及其用途。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

提供一种检测猪PRKAG3基因表达量的方法，包括以下步骤：

S1、提取待测样本猪细胞总RNA并进行cDNA合成；

S2、以cDNA为模板对PRKAG3基因和内参基因进行荧光定量PCR扩增；

S3、分析PRKAG3基因的相对表达量；