[发明专利]游离细胞捕获探针及其相关产品和用途

说明书

本发明公开了一种特异性识别并分离表面表达胎盘样硫酸软骨素(CSA)的细胞的游离细胞捕获探针及其相关产品和用途，尤其是针对胎儿滋养层细胞和恶性肿瘤细胞。本方法构思巧妙，安全可靠，具有很高的灵敏性和特异性。

技术领域

本发明涉及一种生物医学领域，特别是涉及一种表面表达CSA的细胞的游离细胞捕获探针及其相关产品和用途。。

背景技术

妊娠早期进行产前诊断以检测胎儿的基因或者染色体异常等遗传缺陷非常重要。目前，广泛使用的三种产前筛查检测方法主要为：羊水穿刺术、绒毛膜绒毛取样术以及胎儿游离DNA(cfDNA)检测。但是，目前的这三种技术都存在着一定的局限性。羊膜穿刺术：专业技术人员将针头插入胎儿羊膜囊，取羊水20-30ml，然后对其中的胎儿细胞进行细胞遗传学检验，通常在妊娠16周进行；绒毛膜取样：专业技术人员获取胎盘的少量生物活检样本并进行遗传学检测分析，通常在8-12周进行。这两种检测手段能为临床决策提供准确的信息，但这些检测手段为侵入性检测手段，存在增加流产风险(0 .6～2％)、给孕妇造成创伤等不利因素。

在无创产前诊断的方法中，血浆游离胎儿DNA的检测被证明在胎儿非整倍体疾病(21-三体、18-三体、13-三体)诊断中具有良好的灵敏性。近10年兴起的二代无创产前技术(Non-invasive Prenatal Testing) NIPT，基于孕妇外周血中存在少量的胎儿碎片DNA的原理, 采用二代测序技术依赖统计方法排除母体DNA的干扰，检测胎儿是否有21三体或13，18三体。对21三体即唐氏综合征诊断的灵敏度90%，特异性96%，对13三体和18三体的灵敏度及特异性均为90%左右。

然而，根据研究分析，在妊娠的早期和妊娠晚期，cfDNA分别仅占总血浆DNA的大约3 .4％和6 .2％，而且，其含量受到孕妇的年龄，体重，怀孕的时间影响，通常必须到孕周10-12周以后cfDNA才能够达到外周血浆5%的比例，才能够进行检测。 以上种种因素限制了它用于其他遗传性疾病如微缺失、微重复及点突变等的诊断，这对精确的分析来说是很大的挑战，使血浆游离胎儿DNA的检测成为一种筛查手段，而不是一种诊断手段。

高度碎片化的胎儿游离DNA和占据测序样本中绝大多数的母体DNA限制了NIPT准确率的进一步提高，也限制了该方法检测数以万计的其他遗传疾病。目前NIPT检测几乎只针对唐氏综合征一个疾病。我国目前每年有80-120万左右的出生缺陷患儿出生，其中唐氏综合征只占约2%，还有98%的新生儿缺陷完全没有覆盖。

从母体血液中分离胎儿细胞检测是非常有利的方法。母体血液中的胎儿细胞主要有，胎儿有核红细胞和胎儿滋养层细胞两种。但胎儿有核红细胞在血液中的含量非常稀少，在106～107的母体细胞中可能只含有1个胎儿的有核红细胞，其细胞特性与血细胞基本一致，这对于分离来说，是非常困难，而且这些方法只能在孕期较晚时间(12～26周)才能检测，存在局限性。滋养层细胞是在胚胎发育成桑椹胚后，桑椹胚进一步发育，细胞开始出现分化并沿透明带内壁扩展和排列的较小个体细胞，将来发育成胎膜和胎盘。早期就有研究表明，从怀孕5周开始孕妇血液中就存在胎儿滋养层细胞，虽然这些胎儿滋养层细胞数量会随着孕周有所增加，但是增幅并不明显。因此，对胎儿滋养层细胞实现有效分离并获取胎儿DNA，对于最早期的产前筛查和诊断具有重大意义。

据报道，在怀孕5周-26周的孕妇血液中，每10ml血液就有10-180个胎儿滋养层细胞。目前报道的从母体血液中检测胎儿滋养层细胞的方法虽然多种多样，有采用微流控法，根据胎儿细胞和母体血液细胞的尺寸差异等，但是，由于这些检测方法的灵敏度和特异性不够高，操作复杂，稳定性差等缺陷，使其没法在临床上应用。另外，胎儿滋养层细胞在母体血细胞中的比例特别低，目前没有方法能够在大量的母体血细胞中准确标出胎儿滋养层细胞，将其从母体血细胞中准确分离出更是难上加难。目前所报道的所有方法基本都是：在每10ml母体血液中只能检测到1-5个胎儿滋养层细胞。

发明内容