[发明专利]一种喹啉基近红外罗丹明荧光染料、比率荧光探针及其合成和应用

权利要求书

1.一种喹啉基近红外罗丹明比率荧光探针，其特征在于，为Probe RhQ，结构式如下：

。

2.一种如权利要求1所述的喹啉基近红外罗丹明比率荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将4-取代-2-硝基苯甲醛与1,3-环己二酮在铁粉和乙酸作用下缩合，经过后处理得到粗品，再在二氯甲烷中加入三溴化硼，反应结束后处理得到缩合产物；

（2）将步骤（1）缩合产物与 4-二乙氨基酮酸在浓硫酸中加热反应，反应结束后经过后处理得到所述的喹啉基近红外罗丹明荧光染料RQ2；

所述的4-取代-2-硝基苯甲醛为4-二甲氨基-2-硝基苯甲醛；

（3）将步骤（2）所述的荧光染料RQ2经过POCl₃酰氯化后，与3,5-双(三氟甲基)苯硫酚反应，后处理得到喹啉基近红外罗丹明比率荧光探针。

3.一种如权利要求1所述的比率荧光探针在制备生物硫醇检测试剂中的应用。

4.根据权利要求3所述的比率荧光探针在制备生物硫醇检测试剂中的应用，其特征在于，所述的生物硫醇为半胱氨酸和高半胱氨酸。

5.根据权利要求3或4所述的比率荧光探针在制备生物硫醇检测试剂中的应用，其特征在于，所述的荧光探针用于生物硫醇的定性检测，具体方法如下：

将所述的荧光探针配置成测试溶液，然后加入待测样品，分别用410nm和630nm光源激发，测定462nm和712nm处荧光发射强度变化，若462nm处荧光强度变强，712nm处荧光强度变弱，则确定待测样品中含有半胱氨酸或高半胱氨酸；

所述的测试溶液的溶剂为PBS和EtOH的混合溶液，体积比为 1:1。

6.根据权利要求3或4所述的近红外比率荧光探针在制备生物硫醇检测试剂中的应用，其特征在于，所述的荧光探针用于生物硫醇的定量检测，具体方法如下：

（1）将所述的荧光探针配置成测试溶液，然后加入待测样品，分别用410nm和630nm光源激发，测定462nm和712nm处荧光发射强度；

所述的测试溶液的溶剂为PBS和EtOH的混合溶液，体积比为 1:1；

（2）计算得到荧光强度比值I_462nm/I_716nm，根据荧光强度比值I_462nm/I_716nm得到待测样品中的半胱氨酸或高半胱氨酸的含量。

7.根据权利要求3或4所述的近红外比率荧光探针在制备生物硫醇检测试剂中的应用，其特征在于，所述的荧光探针用于细胞内荧光成像测试，具体方法如下：将待测细胞用含有荧光探针的溶液进行孵化，然后PBS洗涤三次，进行共聚焦细胞成像检测；

共聚焦细胞成像检测时，用两个波长分别激发并收集信号，激发波长为405nm时蓝色通道收集波长为420-470nm，激发波长为630nm时红色通道收集波长为680-730nm。