[发明专利]一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法

说明书

本发明提供了一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法，以蝴蝶兰为母本、钻喙兰为父本，通过人工授粉获得杂交果荚，果荚经预处理、种子无菌播种、种子萌发、原球茎增殖与分化、壮苗生根、炼苗移栽等步骤获得远缘杂种后代群体。本发明具有种子萌发率高，成苗数多，成苗时间短，种苗质量好等优点，解决了远缘杂交种子因亲和性不易成功且在自然条件下极难萌发、不易成苗的难题。因此，通过无菌播种人工繁殖的方法，能够在较短的时期内获得大量种苗，为蝴蝶兰远缘杂交优良品种的选育奠定基础。

技术领域

本发明属于组织培养快速繁殖技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法。

背景技术

蝴蝶兰(Phalaenopsis)因其花形奇特、花色艳丽、色泽丰富、花序整齐、花期长，素有“洋兰皇后”的美称。蝴蝶兰是目前世界上销售量最大的兰花品种，在美国的兰花销售量中，蝴蝶兰占所有兰花的75％，同时居荷兰盆花、日本盆栽兰花及我国年宵花卉排行榜的首位，每年全球消费量已超过2.8亿株。近年来，蝴蝶兰的杂交育种取得了巨大的育种成就，在产业发展上作出了重大贡献，但蝴蝶兰的遗传基础仍然相对狭窄。因此，将属间野生种质资源的优良基因导入蝴蝶兰中，丰富蝴蝶兰的基因库，并提高蝴蝶兰的抗性具有重要的理论和实践意义。

钻喙兰(Rhynchostylis retusa)为兰科钻喙兰属多年生植物，是蝴蝶兰的近缘属，原产我国贵州和云南，广布于亚洲热带地区，从斯里兰卡、印度到热带喜马拉雅经老挝、越南、柬埔寨、马来西亚至印度尼西亚和菲律宾。植株具发达而肥厚的气根，根粗6-16毫米；茎直立或斜立，通常长3-10厘米，有时更长，不分枝，具少数至多数节，密被套叠的叶鞘；叶肉质，二列，彼此紧靠，外弯，宽带状。花序腋生，1-3个，长于或近等长于叶，不分枝，常下垂；花白色而密布紫色斑点，开展，纸质。生于海拔310-1400米的疏林中或林缘树干上，花期5-6月，植株抗性强，具有很高的观赏价值和利用价值。

蝴蝶兰远缘杂交存在亲和性障碍，属间杂种胚通常发育不良，且种子无胚乳，在自然条件下极难萌发，不易成苗。因此，通过无菌播种的方法，能够在较短的时间内萌发并获得大量种苗。当前，国内外并未见到有关蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交的无菌播种及其育苗的研究报道。因此，深入研究蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子的萌发与育苗特性，以期为蝴蝶兰与钻喙兰属间远缘杂交育种和新品种培育奠定基础。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供了一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法，通过蝴蝶兰与钻喙兰进行远缘杂交，能够在较短的时期内获得大量的种苗，为蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交优良品种的选育奠定基础，并培育出新型兰花品种，同时为蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种苗生产提供了一条有效的途径。

本发明通过以下技术方案来解决上述技术问题：

一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法,其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)人工授粉:以蝴蝶兰为母本，钻喙兰为父本进行杂交，选择新鲜有活力的花朵，用消毒过的镊子去除母本唇瓣及合蕊柱上的花粉块，同时取父本新鲜的花粉块置于母本蕊腔内；授粉100-120d后，采收未开裂的成熟果荚进行无菌播种；

(2)果荚预处理及种子播种：果荚经流水冲洗后，在超净工作台上用75％酒精擦洗干净，再用0.1％HgCl₂溶液灭菌10-12min，无菌水冲洗3～5次，无菌滤纸吸干残余水分后切开果荚，然后将种子播种于萌发培养基上培养；

(3)种子萌发：将种子播种于所述萌发培养基上培养，培养温度25～28℃，前期暗培养或有散射光即可，后期光照强度1000-1500lx，光照时间12h/d；

(4)原球茎增殖与分化：当种子萌发成嫩绿色原球茎后，转接到增殖与分化培养基上进行培养，培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d；