[发明专利]一种秋石斛兰花芽组织培养快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种秋石斛兰花芽组织培养快速繁殖的方法,其特征在于该方法包括以下步骤：

1)外植体的消毒：选取2-3cm长的幼嫩花芽或花梗为外植体，其中选取的花梗须粗壮、无病害，并截取2-3cm长带有侧芽的花梗茎段；幼嫩花芽或花梗茎段用自来水冲洗干净并剖去苞片，置于超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl₂溶液灭菌8～10min，无菌水冲洗5～8次后，用无菌滤纸吸干残余水分；对于幼嫩花芽，切取0.5-1.0cm长的芽尖接种在诱导培养基上；对于花梗茎段，将其两端各切取0.5cm，并将剩下带有侧芽的花梗茎段接种在诱导培养基上培养，1-2个月后侧芽长至2-3cm，此时切取0.5-1.0cm长的芽尖再次接种在诱导培养基上；

2)芽的诱导：采用诱导培养基培养30～60天，芽尖变绿增大；培养温度26±2℃，有散射光即可；

3)丛生芽的增殖：将芽尖转移到增殖培养基，培养50～60天，获得丛生芽，增殖倍数可达3.0～5.0；培养条件为：培养温度26±2℃，光照强度2000±100lx，光照时间12h/d；

4)继代培养：每50～60天继代增殖1次，一般继代次数不超过15次；转移到继代培养基进行继代培养，培养条件为：培养温度26±2℃，光照强度2000±100lx，光照时间12h/d；

5)壮苗培养：将增殖继代阶段形成的丛生芽转入到壮苗培养基中；培养条件为：培养温度26±2℃，光照强度2000±100lx，光照时间12h/d；

6)生根培养：将壮苗阶段形成的小苗接入到生根培养基中进行生根培养，经过60d左右的培养，苗高可达5～8cm，有2～3条或以上的根，形成健壮的小植株。

7)试管苗移栽：3～5月或10～12月，将试管苗放置于具自然光散射的温室中，其光强8000lx～10000lx，温度20℃～28℃，环境清洁；将瓶苗一字排开，放置于培养架上，炼苗15～20d即可出瓶移栽；首先从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，然后放于0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟，取出后用水苔种植于口径4.8cm的塑料杯盆中；保持温室通风，湿度在70～80％，温度保持在15℃以上，高于30℃必须用风机、水帘降温。

2.如权利要求1所述的秋石斛兰花芽组织培养快速繁殖的方法，其特征在于：所述诱导培养基为Hyponex(花宝1号)3g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)1.0～2.0mg/g+NAA(萘乙酸)0.1～0.5mg/L+AC(活性炭)1.0～3.0g/L+CW(椰子汁)100.0～200.0g/L，培养基含糖30g/L，琼脂7g/L，PH值5.8±0.2。

3.如权利要求1所述的秋石斛兰花芽组织培养快速繁殖的方法，其特征在于：所述增殖培养基Hyponex(花宝1号)3g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)1.0～3.0㎎/L+Ad(腺嘌呤)1.0～3.0㎎/L+CW(椰子汁)100.0～200.0g/L，培养基含糖30g/L，琼脂7g/L，PH值5.8±0.2，培养50～60天，获得丛生芽，增殖倍数可达3.0～5.0。

4.如权利要求1所述的秋石斛兰花芽组织培养快速繁殖的方法，其特征在于：所述继代培养基为Hyponex(花宝1号)3g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)1.0～3.0㎎/L+Ad(腺嘌呤)1.0～3.0㎎/L+CW(椰子汁)100.0～200.0g/L，培养基含糖30g/L，琼脂7g/L，PH值5.8±0.2。

5.如权利要求1所述的秋石斛兰花芽组织培养快速繁殖的方法，其特征在于：所述壮苗培养基为Hyponex(花宝1号)3g/L+CW(椰子汁)100.0～200.0g/L，培养基含糖30g/L，琼脂7g/L，PH值5.8±0.2。

6.如权利要求1所述的秋石斛兰花芽组织培养快速繁殖的方法，其特征在于：所述生根培养基为Hyponex(花宝1号)3g/L+NAA 0.1～0.3mg/L+CW 100.0～200.0g/L，培养基含糖30g/L，琼脂7g/L，PH值5.8±0.2。