[发明专利]一种核桃粕抗氧化肽YFW及其制备方法与应用

说明书

本发明属于食品深加工技术领域，具体涉及一种提取自核桃粕的抗氧化多肽及其制备方法与应用。所述抗氧化肽为Tyr‑Phe‑Trp(C端为Trp，N端为Tyr)。为了获取含有上述抗氧化肽的产品，本发明以核桃粕为原料，再用碱性蛋白酶酶解，酶解液首先经过超滤分离，得到不同分子量范围(0‑3KDa、3‑5KDa、5‑10KDa、10KDa)的核桃粕多肽，继续进行葡聚糖凝胶层析G‑25纯化，所得YFW多肽有较高的抗氧化活性，有利于清除体内的自由基，具有抗氧化活性。

技术领域：

本发明属于食品深加工技术领域，具体涉及一种提取自核桃粕的抗氧化肽及其制备方法与应用。

背景技术：

活性氧自由基(ROS)如超氧阴离子、羟基自由基和过氧化氢等通常产生于生物体代谢过程中。人体自身的抗氧化防御系统如内源性抗氧化酶(包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等)以及抗氧化小分子(包括维生素C、维生素E和谷胱甘肽等)，在清除活性氧和防止细胞损伤中发挥重要作用。然而，ROS的过量产生会导致氧化损伤，进而引发DNA、RNA和膜脂等生物分子氧化，从而导致癌症、动脉粥样硬化、糖尿病和心血管等多种疾病以及衰老等。因此，需要摄入足够的抗氧化剂来预防或减缓ROS引起的氧化应激。在食品系统中，由食物氧化变质引起的脂质过氧化物和脂质自由基等有毒化合物的形成是导致食品质量和安全性下降的原因。为了保持食品的风味、颜色和营养价值，有必要通过添加抗氧化剂来抑制脂质过氧化。在食品工业中，合成抗氧化剂已经被用于食品中，以防止氧化作用的恶化，然而，由于其潜在的健康危害，合成抗氧化剂的使用受到严格的管制。因此，寻找安全的天然抗氧化剂是食品科学技术领域的重要课题。

近年来，抗氧化多肽因其来源广泛、分子量小，易吸收、安全无毒等优点受到了广泛关注。人们对抗氧化肽的研究范围比较广泛，如：大豆肽、牡蛎肽、卵蛋白肽和乳清蛋白肽等，此外，还有一些比较特殊的抗氧化肽，如：基于蛋氨酸亚砜还原酶A(一种抗氧化酶)研发的重组Trx-TAT-hMsrA蛋白等，它们均已表现出稳定、安全、有效的抗氧化、抗衰老功能。天然还原肽可以降低与氧化、衰老等相关疾病的发生几率，因此，常被用于防衰老保健食品和药妆品的研究和开发。与人工合成的还原剂相比，植物蛋白酶解得到的还原肽更容易被人体充分吸收且无毒副作用。在食品方面，抗氧化肽作为原辅料直接添加到食品中，可以有效阻止或减缓食品氧化变质、改善食品品质、延长食品保质期；在化妆品和医药工业方面，抗氧化肽作为重要原料直接添加到化妆品或药品中，可有效预防和治疗由氧化反应产生的自由基引起的各种疾病，减缓机体衰老速度。目前，抗氧化肽乳液、抗氧化肽面膜、抗氧化肽药物等也逐渐出现在市场中。

核桃(Juglans regia L.)是市面上常见的坚果类作物之一，具有丰富的营养价值和药用功效。核桃榨油后产生大量的副产物核桃粕，通常以饲料低价出售，不仅造成核桃蛋白资源的浪费，也严重阻碍了核桃产业的发展。生物酶解技术作为一种绿色生物转化手段，一方面有助于提高底物的生物利用率，另一方面可以将核桃粕蛋白分解成更利于人体吸收的小分子化合物，增加功能活性，提高营养价值。

本研究以冷榨核桃粕为原料，利用生物酶解法制备核桃多肽，采用超滤、葡聚糖凝胶层析等方法分离纯化核桃粕蛋白酶解液，并测定其ABTS自由基清除能力，筛选出抗氧化活性较高的多肽组分，对纯化后的核桃粕多肽进行液质分析，确定核桃粕多肽的氨基酸序列，人工合成抗氧化多肽，并检测抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羟自由基清除能力以及铁离子还原能力)。

发明内容：

为了解决上述技术问题，本发明首先提供一种提取自核桃粕的抗氧化肽，所述抗氧化肽氨基酸序列为Tyr-Phe-Trp(C端为Trp，N端为Tyr)。

本发明还提供获取上述多肽的方法，具体如下：