[发明专利]SlmiR319b在调控番茄株型中的应用及重组质粒、重组菌、转基因株系有效
| 申请号： | 202010724278.9 | 申请日： | 2020-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN111748556B | 公开（公告）日： | 2023-10-20 |
| 发明（设计）人： | 刘欣;姜晶;李天来;程欣;张洪辉 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/00;A01H6/82;C12Q1/6895;C12R1/01 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 崔瑞迎 |
| 地址： | 110161 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | slmir319b 调控 番茄 株型 中的 应用 重组 质粒 转基因 | ||
1.一种SlmiR319b在调控番茄株型中的应用，其特征在于，所述SlmiR319b的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种含有权利要求1所述的SlmiR319b核苷酸序列的重组质粒。
3.根据权利要求2所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，包括：人工合成SlmiR319b核苷酸序列；将SlmiR319b核苷酸序列经限制性内切酶XbaI和SmaI双酶切，连接至pCAMBIA3301载体中，得到重组质粒pCAMBIA3301/Luc-preSlmiR319b。
4.一种包含权利要求2所述的重组质粒的农杆菌。
5.一种包含权利要求2所述的重组质粒的转基因番茄株系。
6.根据权利要求5所述的转基因番茄株系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
以重组质粒pCAMBIA3301/Luc-preSlmiR319b转化农杆菌，获得转化菌菌液；
以野生型栽培番茄作为遗传转化材料，取饱满完整的种子，利用所述农杆菌菌液进行遗传转化，并培养获得转化植株；
从番茄植株叶片中提取基因组DNA，以miR319b-F/miR319b-R为引物进行PCR鉴定；
miR319b-F:TCTAGA ATTTTGTGATTTAGATGTAATGTGG
miR319b-R:CCCGGGCTTCCACATTACATCTAAATCACA
以转化植株为检测对象，以重组质粒pCAMBIA3301/Luc-preSlmiR319b为阳性对照，以未转化的野生型JZ34为阴性对照；若检测对象的扩增结果与阳性对照一致，则该检测对象为阳性转化植株；
对上述筛选出阳性转化植株进行TCP10表达水平检测，以野生型JZ34的TCP10表达量为对照，TCP10的表达水平低于野生型JZ34的为目的转基因番茄株系。
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