[发明专利]一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法

权利要求书

1.一种包埋脱氮硫杆菌的固定化微球的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤，

（1）将脱氮硫杆菌接种到水性培养基中培养，得到脱氮硫杆菌的水溶液，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于10⁸CFU/ml，然后离心得到湿菌体；

（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，在95-99℃水浴加热中使其变成粘稠液体，然后冷却到50-60℃，向其中加入火山岩粉，冷却之后在115-125℃下高温灭菌，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；

（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉，然后灭菌；

（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合均匀后吸附10-20min后，制得用于包埋的包埋体；

（5）将步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的灭菌之后的包埋剂混合均匀，所述包埋体和包埋剂的质量比8:1-10:1，滴加到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；

（6）将步骤（5）得到的固定化微球用去离子水洗涤后，在-20℃下冷冻保存，冷冻期间解冻风干1-2次，最后解冻得到包埋脱氮硫杆菌的固定化微球；

步骤（2）中得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂中，聚乙烯醇的质量分数为7.5%-10%，海藻酸钠的质量分数为0.8%-3%，火山岩粉的质量分数为0.5%-5%；

冷却温度为20-26℃；

步骤（2）中火山岩粉粒径为30-45μm；

步骤（4）中，步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体的质量比为8:1-10:1；

步骤（5）中，所述交联剂为饱和硼酸和氯化钙的混合溶液，其中氯化钙的质量分数为2%-5%；

步骤（6）中，冷冻保存时间为24-48h；解冻的温度为0℃-3℃。

2.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，将脱氮硫杆菌接种培养基中，脱氮硫杆菌的接种量为10%，调节所述培养基的pH到7.0，121℃下灭菌30min，控温28-32℃，培养12-24h，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于10⁸CFU/ml，最后离心得到湿菌体；

所述培养基包括以下重量份的组分，去离子水1000份，五水合硫代硫酸钠5-6份，硝酸钾2-3份，碳酸氢钠1-2份，磷酸二氢钾1-2份，六水合氯化镁0.5-1 份。

3.根据权利要求2所述的一种包埋脱氮硫杆菌的固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，离心机转速为3000-4000r/min，离心时间为5-8min。

4.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，将牡蛎壳先在水中冲洗去除泥沙，然后在水中浸泡，浸泡时间为48-72h，浸泡完成后捞出后在95-100℃下烘干，然后用盐酸将牡蛎壳表面清洗干净，最后，用蒸馏水将牡蛎壳表面的残余盐酸洗净；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成牡蛎壳然后烘干；

步骤（3）中，灭菌为将在紫外灯下照射25-30min。

5.根据权利要求4所述的一种包埋脱氮硫杆菌的固定化微球的制备方法，其特征在于：所述盐酸的质量分数为3%-5%；

洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成40-60目，然后在120-160℃下烘干。