[发明专利]DNA/Fe3

说明书

本发明公开了一种DNA/Fe₃O₄网状结构结合磁性三相萃取法的核酸检测方法，包括以下步骤：(1)制备Fe₃O₄纳米片；(2)在Fe₃O₄纳米片上修饰单链DNA得到Fe₃O₄/ssDNA；(3)制备超支化DNA结构样品，将超支化DNA结构样品与Fe₃O₄/ssDNA混合反应，得到DNA/Fe₃O₄网状结构；(4)将DNA/Fe₃O₄网状结构所在体系作为水相，和有机相混合，将带有萃取液滴的磁性棒浸入有机相，萃取DNA/Fe₃O₄网状结构后取出，利用紫外‑可见光谱仪对发生催化显色反应的液滴进行监测，分析紫外‑可见光谱数据即得待测样品中目标核酸的含量。该方法大大降低了核酸的检出限，实用性高，对于microRNA‑122的检出限低至0.147aM，对H‑DNA的检出限低至0.34aM，线性范围分别为0.5aM至1pM以及1aM至1pM(r²0.995)，利用单滴微萃取技术，检测效率高，操作简单，成本低。

技术领域

本发明涉及一种核酸检测方法，更具体地，涉及一种DNA/Fe₃O₄网状结构结合磁性三相萃取法的核酸检测方法。

背景技术

生物液中成分复杂，因此在检测某些核酸(microRNA或DNA)容易受到基质效应的影响，导致现有检测方法的不准确度不够高。目前绝大多数核酸检测方法依赖于杂交，如目标microRNA或DNA分子与互补标记的寡核苷酸探针杂交。然而，单独的核酸杂交不能满足灵敏度和准确性的要求。近年来，DNA与纳米材料相结合的纳米技术的发展为用于早期诊断的生物传感器提供了一种新的信号放大策略。DNA纳米技术不仅可以利用DNA的刚性链在可编程的纳米尺度上构建高度有序的结构，也可以利用可控和预先设计的DNA与纳米材料相结合的方法，产生稳定的放大信号。然而，由于检测只依赖于DNA的杂交，因此检出限过高，通常在pM到nM范围内，因此限制了其实际应用。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种检出限低、检测效率高、适于实际应用的DNA/Fe₃O₄网状结构结合磁性三相萃取法的核酸检测方法。

技术方案：本发明所述的利用类过氧化物酶超支化DNA/Fe₃O₄网状结构结合磁性三相单滴微萃取技术定量检测核酸的方法，包括以下步骤：

(1)制备Fe₃O₄纳米片；

(2)在Fe₃O₄纳米片上修饰碱基单链DNA得到Fe₃O₄/ssDNA；

(3)将含有目标核酸的待测样品进行超支化CHA处理，得到超支化DNA结构样品，将超支化DNA结构样品与Fe₃O₄/ssDNA混合进行反应，得到DNA/Fe₃O₄网状结构；

(4)将DNA/Fe₃O₄网状结构所在体系作为水相，和有机相混合，将带有萃取液滴的磁性棒浸入有机相，萃取DNA/Fe₃O₄网状结构后取出后，利用紫外-可见光谱仪对发生催化显色反应的液滴进行监测，分析紫外-可见光谱数据即得待测样品中目标核酸的含量。