[发明专利]用于区分检测硫醇及监测Cys/GSH代谢的荧光探针及其制备方法

权利要求书

1.一种用于区分检测硫醇及监测Cys/GSH代谢的荧光探针，其特征在于，结构式为：

2.如权利要求1所述的一种用于区分检测硫醇及监测Cys/GSH代谢的荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将等摩尔量的4-二乙氨基水杨醛和6-羟基-1-四氢萘酮加入圆底烧瓶中，然后加入冰醋酸和高氯酸，加热回流1.5小时，冷却，倒入乙酸乙酯：石油醚＝1:1的溶液中，静置过滤得10-(二乙基氨基)-3-羟基-5,6-二氢苯并[c]呫吨12-高氯酸鎓(化合物1)；

(2)将步骤(1)制得的化合物1溶于二氯甲烷中，搅拌下加入等摩尔量的4-氯-7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-甲醛，随后加入催化剂量的三乙胺，室温搅拌过夜，然后减压去除溶剂，残留物柱色谱分离得目标产物10-(二乙胺基)-3-((7-(二乙胺基)-3-甲酰基-2-氧代-2H-色烯-4-基)氧基)-5，6-二氢苯并[c]呫吨-12-高氯酸鎓。

3.如权利要求2所述的一种用于区分检测硫醇及监测Cys/GSH代谢的荧光探针的合成方法，其特征在于，所述柱色谱的洗脱剂为体积比20：1的二氯甲烷和甲醇的混合物。

4.一种区分检测硫醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)用二甲基亚砜(DMSO)配制2mM的如权利要求1所述荧光探针储备液；用蒸馏水分别配制2mM的Cys、Hcy和GSH溶液。

(2)将2mL PBS缓冲液(pH＝7.4)和10μL荧光探针储备液加入荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上测定探针的荧光光谱，然后逐渐加入不同体积的Cys、Hcy和GSH溶液，在荧光分光光度仪上测定其荧光光谱，加入Cys、Hcy后探针在480nm和625nm处出现两个新的荧光发射峰(激发为380nm)，随着Cys/Hcy加入荧光强度逐渐增强直到基本不发生变化为止；而加入GSH后探针仅在625nm处出现新的荧光发射峰(激发为380nm)；当激发为450nm时，探针加入Cys/Hcy基本没有变化，而GSH在545nm和625nm处出现两个新的荧光发射峰，因此可以实现区分检测；

(3)对于Cys/Hcy来说，以Cys/Hcy浓度为横坐标，探针在480nm处的荧光强度为纵坐标，绘制图并进行线性拟合，得到该探针的回归方程为：y＝11.659x+41.367(y＝11.008x+68.748)，线性相关系数R²＝0.9950(R²＝0.9969)，检出限为0.10μM(0.02μM)；而GSH则以探针在545nm处的荧光强度为纵坐标，绘制图并进行线性拟合，得到该探针的回归方程为：y＝5.785x+19.507，线性相关系数R²＝0.9964，检出限为0.04μM。