[发明专利]一种生产利普司他汀的培养基及其使用方法

权利要求书

1.一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述培养基为包括固体筛选培养基、斜面固体培养基、种子液培养基和发酵培养基的联合培养基。

2.根据权利要求1所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述固体筛选培养基和斜面固体培养基中均含有辛酰-辅酶和亮氨酸；所述发酵培养基包括发酵基础培养基和发酵流加培养基。

3.根据权利要求2所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述固体筛选培养基和斜面固体培养基的成分均为：可溶性淀粉、酵母粉、干酪素、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂粉、辛酰-辅酶A和亮氨酸。

4.根据权利要求2所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述发酵基础培养基的成分为：糊精、甘油、豆油、黄豆饼粉、酵母粉、抗氧化剂、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸亚铁、碳酸钙、乳化剂；发酵流加培养基的成分为：亚油酸、亮氨酸、抗氧化剂和乳化剂；所述种子液培养基的成分为：糊精、甘油、黄豆饼粉和酵母粉。

5.根据权利要求2或3所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述固体筛选培养基中辛酰-辅酶A和亮氨酸的质量比为6-8:1，所述斜面固体培养基中辛酰-辅酶A和亮氨酸的质量比为3-5:1。

6.根据权利要求4所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述抗氧化剂的组成为维生素C和维生素E，且维生素C：维生素E的质量比为3-8:1。

7.根据权利要求3所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述固体筛选培养基的含量为：可溶性淀粉10-15g/L，酵母粉0.8-1.5g/L，干酪素0.8-1.5g/L，磷酸二氢钾0.2-0.5g/L，硫酸镁0.4-1.0g/L，琼脂粉15-25g/L，辛酰-辅酶A5-10g/L，亮氨酸1-3g/L；所述斜面固体培养基的含量为：可溶性淀粉12-15g/L，酵母粉1.0-1.5g/L，干酪素1.0-1.5g/L，磷酸二氢钾0.2-0.5g/L，硫酸镁0.4-1.0g/L，琼脂粉15-25g/L，辛酰-辅酶A 8-10g/L，亮氨酸2-3g/L。

8.根据权利要求4所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：所述发酵基础培养基的含量为：糊精5-15g/L，甘油5-15g/L，豆油80-130g/L，黄豆饼粉20-35g/L，酵母粉10-25g/L，抗氧化剂0.5-1.5g/L，磷酸二氢钾0.2-0.5g/L，硫酸镁0.3-0.5g/L，硫酸亚铁0.1-0.3g/L，碳酸钙0.5-1.0g/L，乳化剂10-20g/L；发酵流加培养基的含量为：亚油酸5-10g/L，亮氨酸5-10g/L，抗氧化剂3-5g/L，乳化剂3-5g/L；所述种子液培养基的含量为：糊精15-25g/L，甘油15-25g/L，黄豆饼粉20-25g/L，酵母粉5-10g/L。

9.根据权利要求7或8所述一种生产利普司他汀的培养基，其特征在于：固体筛选培养基的含量为：可溶性淀粉13g/L，酵母粉1.0g/L，干酪素1.0g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，硫酸镁0.6g/L，琼脂粉22g/L，辛酰-辅酶A 8g/L，亮氨酸1.2g/L；所述斜面固体培养基的含量为：可溶性淀粉13g/L，酵母粉1.2g/L，干酪素1.3g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，硫酸镁0.6g/L，琼脂粉22g/L，辛酰-辅酶A 9g/L，亮氨酸2.5g/L；所述种子液培养基的含量为：糊精20g/L，甘油21g/L，黄豆饼粉24g/L，酵母粉8g/L；所述发酵培养基中的发酵基础培养基的含量为：糊精12g/L，甘油12g/L，豆油90g/L，黄豆饼粉25g/L，酵母粉20g/L，抗氧化剂1.2g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，硫酸镁0.4g/L，硫酸亚铁0.2g/L，碳酸钙0.8g/L，乳化剂18g/L；所述发酵培养基中的发酵流加培养基的含量为：亚油酸8g/L，亮氨酸6g/L，抗氧化剂3g/L，乳化剂5g/L。

10.一种生产利普司他汀的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A、菌株筛选：将利普司他汀生产菌株涂布于固体筛选培养基，置于28±1℃，空气相对湿度50％±10％条件下培养5天，得到生长成熟的单菌落；

B、单菌落斜面：挑选单菌落接种于斜面固体培养基上，置于28±1℃，空气相对湿度50±10％条件下培养6天，得到生长成熟的菌苔；

C、种子液培养：将生长成熟的菌苔接种到种子液培养基中，28±1℃，培养20-25h，得到生长成熟的种子液；

D、发酵培养：将生长成熟的种子液按照5-8％的接种量接种到发酵基础培养基中，28±1℃，培养5-6d，并在培养过程24-36h后开始流加所述发酵流加培养基，流加速度依据培养基中的亮氨酸含量确定，保持所述亮氨酸含量为在0.1-0.2mg/L。