[发明专利]一种血浆中小檗碱的定量分析方法

说明书

本发明揭示了一种血浆中小檗碱的定量分析方法，包括步骤：S1.通过固相支撑的液液萃取法对血浆做前处理，具体为：先稀释血浆，而后在固态填料中着床吸附，再用酯类有机溶剂洗脱小檗碱并干燥，最后用作为流动相的有机溶剂混合液将小檗碱均匀混样于分析柱中，得到含小檗碱的有机溶剂混合液；S2.用质谱仪对有机溶剂混合液进行液相二级质谱分析。本发明该方法操作简便，易于自动化作业，节省劳力且产出高；萃取效果超净，无乳胶装液体形成；省却了大量传统萃取作业的材料及设备，节省成本且有利于环保。

技术领域

本发明涉及一种檗碱的分析方法，尤其涉及一种利用固相支撑的液液萃取（SLE）液相色谱质谱（LC-MS/MS）对血浆中小檗碱进行定量分析的方法。

背景技术

小檗碱亦称黄连素，是从中药黄连中分离的一种季铵生物碱，是黄连抗菌的主要有效成分，为黄色针状结晶，味苦。在植物界中分布较广，大约有4个科10个属内发现有本品存在。

小檗碱对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌和弗氏、志贺氏痢疾杆菌等均有抗菌作用，并有增强白血球吞噬作用，对结核杆菌、鼠疫菌也有不同程度的抑制作用，对大鼠的阿米巴菌也有抑制效用。小檗碱在动物身上有抗箭毒作用，并具有末梢性的降压及解热作用。由此可见，小檗碱在临床医药研究方面具有举足轻重的意义，而对其精准的定量分析则是重要的一个方面。

当前，在定量检测人血浆小檗碱中，一般采用蛋白沉淀法为多。但该方法具有非常强大的基质效应，限制液相色谱质谱（LC-MS/MS）的分析能力最大化的发挥，即使用Sciex6500也只能达到20.0pg/ml的灵敏程度效果。为此，如何改良小檗碱定量分析的前处理手段，最大化液相色谱质谱（LC-MS/MS）的分析能力，便成为本行业研究员所致力于的主要方面。

发明内容

本发明的目的旨在提出一种血浆中小檗碱的定量分析方法，以实现提升定量分析灵敏度下限的目的。

本发明实现上述目的的技术解决方案是，一种血浆中小檗碱的定量分析方法，包括步骤：

S1.制备样品：通过固相支撑的液液萃取法对血浆做前处理，得到含小檗碱的有机溶剂混合液；

S2.定量分析：用质谱仪对有机溶剂混合液进行液相二级质谱分析。

其中：所述固相支撑的液液萃取法包括步骤：a1.先稀释血浆；a2.而后在固态填料中着床吸附；a3.再用酯类有机溶剂洗脱小檗碱并干燥；a4.最后用作为流动相的有机溶剂混合液将小檗碱均匀混样于分析柱中。

其中：所述固相支撑的液液萃取法步骤a1中，稀释血浆的前处理溶液为盐酸、甲酸、乙酸、氨水中择一的挥发性液剂。

其中：所述固相支撑的液液萃取法步骤a1中，所述挥发性液剂为10%的氨水。

其中：所述固相支撑的液液萃取法步骤a1中，在稀释血浆的同时添加同位素内标。

其中：所述固相支撑的液液萃取法步骤a2中，采用的固体填料为多孔颗粒型矽藻土填料。

其中：所述固相支撑的液液萃取法中有机溶剂混合液为由第一流动相和第二流动相混匀制得，其中第一流动相为含1%甲酸的醋酸铵水溶液，第二流动相为含1%甲酸的乙腈。

其中：所述固相支撑的液液萃取法步骤a3中，洗脱的小檗碱在96孔收集板中完成干燥。

其中：所述固相支撑的液液萃取法步骤S2中，定量分析中所用质谱仪的型号为Sciex 4000或更高型号。

本发明提供的血浆中小檗碱的定量分析方法操作简便，易于自动化作业，节省劳力且产出高；萃取效果超净，无乳胶装液体形成；省却了大量传统萃取作业的材料及设备，节省成本且有利于环保。

附图说明