[发明专利]一种测定大黄醛中杂质丹蒽醌和大黄素的分析方法

说明书

本发明为采用LC‑MS/MS测定大黄醛中杂质丹蒽醌与大黄素的分析方法，具体涉及一种测定大黄醛中杂质丹蒽醌和大黄素的分析方法，包括如下步骤：步骤（1）确定离子源：步骤（2）确定母离子：步骤（4）确定质谱方法：步骤（5）确定液相方法。本发明的有益效果：本发明采用LC‑MS/MS测定大黄醛中大黄素与丹蒽醌，对照品浓度可达到75ng/ml，当检测限为15ppm时，样品浓度为5mg/ml，此时样品响应较好，峰型较好。同时，PICs子离子确认扫描可以排除假阳性的干扰。

技术领域

本发明为采用LC-MS/MS测定大黄醛中杂质丹蒽醌与大黄素的分析方法，具体涉及一种测定大黄醛中杂质丹蒽醌和大黄素的分析方法，本发明涉及LC-MS/MS的运用、相关质谱条件的优化及液相色谱条件的优化。

背景技术

LC-MS/MS为三重四级杆串联质谱仪，第一级和第三级四极杆分析器分别为MS1和MS2，第二级四极杆分析器所起作用是将从MS1得到的各个峰进行轰击，实现母离子碎裂后进入MS2再行分析。MS/MS最基本的功能主要是MS1中的母离子和MS2中的子离子间的联系。根据MS1和MS2的扫描模式，如子离子扫描、母离子扫描和中性碎片丢失扫描，可以查明不同质量数离子间的关系。MS/MS在混合物分析中有很多优势。在质谱与气相色谱或液相色谱联用时，即使色谱未能将物质完全分离，也可以进行鉴定。MS/MS可从样品中选择母离子进行分析，而不受其他物质干扰。MS/MS在药物领域有很多应用。子离子扫描可获得药物主要成分、杂质和其他物质的母离子的定性信息，有助于未知物的鉴别，也可用于肽和蛋白质氨基酸序列的鉴别。在药物代谢动力学研究中，对生物复杂基质中低浓度样品进行定量分析，可用多反应监测模式(multiple reaction monitoring，MRM)消除干扰。如分析药物中某特定离子，而来自基质中其他化合物的信号可能会掩盖检测信号，用MS1/MS2对特定离子的碎片进行选择监测可以消除干扰。MRM也可同时定量分析多个化合物。在药物代谢研究中，为发现与代谢前物质具有相同结构特征的分子，使用中性碎片丢失扫描能找到所有丢失同种功能团的离子，如羧酸丢失中性二氧化碳。如果丢失的碎片是离子形式，则母离子扫描能找到所有丢失这种碎片的离子。

质谱仪一般由四部分组成：进样系统——按电离方式的需要，将样品送入离子源的适当部位；离子源——用来使样品分子电离生成离子，并使生成的离子会聚成有一定能量和几何形状的离子束；质量分析器——利用电磁场(包括磁场、磁场和电场的组合、高频电场、和高频脉冲电场等)的作用将来自离子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置，时间先后或运动轨道稳定与否等形式进行分离；检测器——用来接受、检测和记录被分离后的离子信号。一般情况下，进样系统将待测物在不破坏系统真空的情况下导入离子源，离子化后由质量分析器分离再检测；计算机系统对仪器进行控制、采集和处理数据。

本实验现有设备QTRAP 6500plus LC-MS/MS及QTRAP 6500LC-MS/MS，其具有两个离子源，大气压离子源(APCI)和电喷雾离子源(ESI)，ESI源分析离子型/极性化合物、难挥发或热不稳定性化合物；APCI源分析一定挥发性的中等极性或低极性的小分子化合物。同时QTRAP 6500还具有两个分析器，即四级杆分析器和离子阱分析器，四极杆分析器对选择离子分析具有较高的灵敏度。离子阱在全扫描模式下仍然具有较高灵敏度，而且单个离子阱通过时间序列的设定就可以实现多级质谱(MSn)的功能。

大黄素与丹蒽醌均属于蒽醌类化合物，对癌细胞均有抑制作用，目前规定了大黄素标准为液相色谱串联质谱测定法，丹蒽醌目前没有规定，而蒽醌类化合物大多采用液质联用仪进行测定。

采用液质联用仪测定蒽醌类化合物，物质响应偏低且残留严重，检测时需要提高样品浓度从而导致样品严重浪费，且残留严重造成效率低，存在需要清洗仪器、重复检测的问题。同时，液质联用仪检测样品时，碎片较少，定性信息少，容易产生假阳性的问题。

发明内容