[发明专利]一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法

说明书

本发明申请属于种质资源学技术领域，具体公开了一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法，包括对木薯的叶片和块根部位进行取样，然后经65℃水浴预热过的85％甲醇混合处理，并放入100℃水浴内加热后于冰上充分冷却，而后通过离子阱质谱仪对氰苷进行提取。本方案主要应用在对木薯中氰苷含量的提取过程中，可做为木薯食用品种选育中氰苷含量鉴定的有效方法，解决了现有技术中对木薯直接提取氰苷的方法存在提取周期较长、组织样品的需求量较大、同一样品测定结果变幅较大的问题。

技术领域

本发明属于种质资源学技术领域，具体公开了一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法。

背景技术

木薯(Manihot esculent Crantz.)隶属大戟科木薯属，是世界三大薯类作物之一，广泛种植于热带和亚热带地区。在非洲和中南美洲木薯是主要的粮食作物，在我国，除了部分用于食用和饲用外，主要用来提取淀粉以及酒精。随着我国耕地逐年减少、人口越来越多，粮食安全问题日益突出。木薯具有抗旱、耐瘠薄等特点，在较少水肥条件下也可获得比较高的收成，因此，选育食用木薯品种、发展食用木薯生产，可在一定程度上缓解我国的粮食紧张问题。另外，木薯还是畜牧养殖的重要原料，可节约玉米稻谷等粮食原料，从而大大节约养殖成本。木薯无论作为人类的粮食还是畜牧业的养殖原料，一个不利因素是其块根以及叶片中含有氰苷。氰苷，也叫生氰葡萄糖苷，是一种广泛存在于高等植物中的糖苷类次生代谢产物，在植物受到虫害、动物啃食等损伤的情况下，会转化为醇腈，醇腈在alpha-醇腈裂解酶催化下裂解产生氢氰酸，对动物产生毒害，同时对植物自身起保护作用，这个过程被称为生氰反应。含有氰苷可使木薯的抗逆性增强，对其自身有益，但低氰苷含量则是木薯作为粮食的重要前提。因此，选育低氰苷含量的木薯品种，是培育食用木薯的重要课题。

目前，生产试验中常见的是通过测定木薯叶片或块根中的氢氰酸含量来指导低氰苷品种选育。做法是破碎样品使其中的氰苷在醇腈裂解酶催化下裂解释放出可溶性的氢氰酸，再通过蒸馏收集然后通过硝酸银滴定法等测得样品中氢氰酸的含量，也有直接提取氰苷的报道。但这类方法存在的问题一是周期较长，释放氢氰酸通常需要数小时甚至过夜；二是需要的组织样品量较大，通常需要10克甚至更多的样品才能进行实验；三是重复性差，同一样品结果变幅较大。本文介绍一种快速提取木薯叶片和块根中氰苷的方法，该方法快速高效，结果的重复性强，所需组织量少，木薯低氰苷品种的选育工作中可做参考。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法，以解决现有技术中对木薯直接提取氰苷的方法存在提取周期较长、组织样品的需求量较大、同一样品测定结果变幅较大的问题。

1.为了达到上述目的，本发明的技术方案为：一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法，包括以下步骤：

(1)、对木薯的叶片和块根部位进行取样；叶片选取第一伸展叶，叶片的取样部位为第一伸展叶的中间位置，通过2mL eppendorf离心管盖对第一伸展叶的中间位置进行夹取从而获得叶片样品，将叶片样品装入2mL eppendorf离心管内并将管盖扣合，然后迅速放到冰上；块根选取整个块根的中间部位，通过刀具将块根的中间部位切成4-6mm厚的片状块根，块根的取样部位为片状块根的中间位置和韧皮部及木质部交界的部分，通过打孔器分别对片状块根的中间位置和韧皮部及木质部交界的部分打孔操作从而获得直径为6-10mm的块根样品一、块根样品二，将块根样品一、块根样品二分别装入到2mL eppendorf离心管内并将管盖扣合，然后迅速放到冰上。

(2)、在通风橱内用65℃水浴预热85％甲醇备用。

(3)、对于叶片样品，先往每个装有叶片样品的2mL eppendorf离心管内加入300uL经步骤(2)预热过的85％甲醇，然后将2mL eppendorf离心管的管盖扣合，接着用离心管盖锁封锁2mL eppendorf离心管，接着将2mL eppendorf离心管置于浮漂上放入100℃水浴内加热3分钟，3分钟后取出并置于冰上充分冷却。