[发明专利]一种阳离子脂质体禽流感疫苗及其制备方法

说明书

本申请公开一种阳离子脂质体禽流感疫苗的制备方法。该方法基于荷载十八胺阳离子脂质体制备出的疫苗，可明显提高抗原提呈细胞对抗原的提呈能力,能引发CD4+与CD8+T细胞反应，诱导产生强炎症反应，提高记忆T细胞的感应并增加其维持能力，疫苗的粒径约450nm，疫苗的包封率均在50％以上，在某些抗原浓度抗原下，包封率均超过70％,随着抗原浓度的提高,包封率逐步提高。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，具体的涉及一种荷载十八胺的阳离子脂质体禽流感疫苗及其制备方法。

背景技术

佐剂是指能增强机体抗原免疫应答或改变免疫应答类型的物质，其主要作用是为了增强机体免疫系统的反应强度和持久性。现有疫苗佐剂多为油佐剂或铝胶佐剂，存在局部刺激大、不良反应多、疫苗稳定性差、效力不高等问题。国内白油佐剂工艺不高，质量不稳定，目前我国疫苗企业使用的佐剂主要依赖进口，造成疫苗制剂的生产成本大幅度提高和产品价格上涨。因此，研制新型疫苗佐剂是提高疫苗安全、效力的重要途径，也是打破国外行业垄断的必由之路。此外，现有疫苗佐剂产生免疫保护率低、免疫期短，同时油乳剂不易被机体吸收并有刺激性，容易导致注射部位红肿或溃烂等副作用，影响动物产品的品质。随着人们对食品安全的高度关注，开发高效、安全、绿色的新型纳米佐剂具有广阔的应用前景。

禽流感(Avian influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的一种以禽类为主要感染群体的呼吸道疾病,该病危害养禽及相关产业持续发展的同时,也威胁着人类的健康。H9N2亚型禽流感病毒从20世纪90年代开始在世界范围内流行,一般情况下不能引起禽严重的临床症状,但易引起其他病原继发感染,增加禽死亡率。近年来,对我国部分活禽市场及发生呼吸道感染的蛋鸡、肉鸡开展H9N2亚型禽流感病原检测,发现H9N2亚型的阳性率高达60％以上,说明H9N2亚型禽流感在我国广泛存在。目前，H9N2亚型禽流感灭活疫苗主要是由灭活的H9N2亚型禽流感病毒液后的半成品与油佐剂以适当比例混合配置而成，但油佐剂不良反应严重，皮下注射会引起炎症、溃疡和肉芽肿，并且油类物质长期潴留于组织中不易代谢，造成禽类肉制品的食品安全问题。因此，开发高效低毒的新型禽流感纳米疫苗佐剂就显得十分迫切和必要。

发明内容

为克服上述缺陷，本申请的目的在于：提出一种基于荷载十八胺的阳离子脂质体佐剂的禽流感疫苗及其制备方法。该佐剂通过荷载十八胺制备的阳离子纳米脂质体，该脂质体兼具佐剂和递送系统的功能，作为递送系统可荷载禽流感疫苗抗原，可明显提高抗原提呈细胞对抗原的提呈能力。

为了达到以上目的，本申请如下技术方案：

一种阳离子脂质体禽流感疫苗的制备方法，其特征在于，

所述制备方法包含如下步骤：

S1、将大豆磷脂、胆固醇、PEG500-DSPE及十八胺按照一定的比例溶解于有机溶剂中,以制备荷载十八胺的阳离子脂质体，

S2、将H9N2型流感病毒裂解疫苗原液加入到制备的荷载十八胺的阳离子脂质体中并进行充分混合，以制成脂质体禽流感疫苗。

在一较佳的实施方式中，该步骤S1中，还包括在真空度介于0.05～0.15MPa及转速150r/min条件下，真空旋转蒸发混合液第一预预设时间。

在一较佳的实施方式中，该步骤S1中大豆磷脂、胆固醇、PEG500-DSPE及十八胺的微摩尔比例为54：23：4：2.5。

在一较佳的实施方式中，该步骤S2中包括：在30-40℃的环境温度下充分搅拌混合,使得充分搅拌后无有机溶剂残留。

在一较佳的实施方式中，该步骤S2之后还包括，充分混合后制备的脂质体禽流感疫苗通过碳酸纤维膜筛选粒径。