[发明专利]一种复合消化酶及复合消化酶冻干粉

说明书

本发明实施例公开了一种复合消化酶及复合消化酶冻干粉，属于生物组织消化技术领域，其原料包括：胶原酶Ⅰ型、脱氧核糖核酸酶Ⅰ型、透明质酸酶和胰蛋白酶，所述胶原酶Ⅰ型、脱氧核糖核酸酶Ⅰ型、透明质酸酶和胰蛋白酶含量比例为：10‑20：0.1‑0.3：1‑3：2.5‑5。本发明实施例制得的复合消化酶冻干粉易储存和运输，使用方便，消化能力强，适用于消化大多数肿瘤组织，对于消化如乳腺癌等质地坚硬的组织更加适用，具有很好的通用性。

技术领域

本发明属于生物组织消化技术领域，尤其涉及一种复合消化酶及复合消化酶冻干粉。

技术背景

原代细胞因其特性如拥有正常细胞的形态、能够体现该细胞在生物体内所应该具备的标记和功能，并且克服了连续传代细胞系的污染问题，在基础研究、药物研究与开发和生物制药等领域得到广泛的应用。

在原代细胞培养中，组织消化酶常常用于分离消化组织使其成为单个细胞，是哺乳动细胞分离的主要试剂，应用广泛。

目前，实验室常用的消化酶有胰蛋白酶(Trypsin)和胶原酶(Collagenase)。胰蛋白酶是一种蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞间结合处蛋白降解，细胞由于自身内部细胞骨架的张力作用成为球形，从而使细胞分开。胶原酶的化学本质也是一种蛋白质，它能在生理pH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶主要水解结缔组织中胶原蛋白成分，当组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。

实际工作中发现，由于拟消化的组织各有不同，尤其是某些部位的肿瘤组织质地坚硬，单一使用一种消化酶常造成组织消化不完全、消化时间过长、难以获得足够数量和优良增殖能力的细胞以供研究使用。目前各个实验室都是根据文献或经验自行配制消化酶，不但工作繁琐、费时费力，而且酶活力难以得到保持、不耐长期保存、性能不稳定，酶解效果千差万别。

中国专利CN109694846A公开了“含有胰蛋白酶抑制剂的试剂盒及其应用”，包括VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10-1250:0.1-20:500-100000:1，优选为50-625:0.5-10:2000-50000:1；还公开了试剂盒在从胰腺样品中分离单细胞中的应用，特别是在制备用于从胰腺样品中分离单细胞的医疗器具中的应用。该专利仅适用于胰腺组织样品的单细胞分离，适用范围较为局限；制得的试剂盒保存条件要求较高，保存时间较短，酶活性很容易失活无效，试剂盒组份多，需要临时配制，造成使用和运输不够便捷。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中不同消化组织配制不同消化酶，费时费力，且酶活性难以保持不耐长期保存的技术问题，提供一种复合消化酶及复合消化酶冻干粉。

一种复合消化酶，其特征在于，其原料包括：胶原酶Ⅰ型、脱氧核糖核酸酶Ⅰ型、透明质酸酶和胰蛋白酶。

优选的，所述胶原酶Ⅰ型、脱氧核糖核酸酶Ⅰ型、透明质酸酶和胰蛋白酶含量比例为：10-20：0.1-0.3：1-3：2.5-5。

优选的，所述胶原酶Ⅰ型、脱氧核糖核酸酶Ⅰ型、透明质酸酶和胰蛋白酶含量比例为：14:0.3:1:5。

一种复合消化酶冻干粉，其原料包括胶原酶Ⅰ型、脱氧核糖核酸酶Ⅰ型、透明质酸酶和胰蛋白酶。

优选的，一种复合消化酶冻干粉，其原料还包括蔗糖、甘露醇和无钙镁磷酸缓冲盐。

优选的，所述胶原酶Ⅰ型、脱氧核糖核酸酶Ⅰ型、透明质酸酶和胰蛋白酶含量比例为：10-20：0.1-0.3：1-3：2.5-5。