[发明专利]一种转基因棉花COT102品系的双重荧光定量PCR检测

说明书

本发明提供了一种转基因棉花COT102品系的双重荧光定量PCR检测。本发明的方法包括同时针对两种目标基因进行扩增，所述的两种目标基因包括COT102基因和ACP1基因，根据扩增情况来确定棉花COT102转基因品系的存在情况或存在量，或测定转基因品系的存在比例。本发明的方法一方面解决了现有技术中没有针对棉花COT102品系的双重PCR定量检测方法的问题；另一方面针对该转基因品系的特点，确立了效果优异的检测试剂、优化了检测方法，检测效率非常高。本发明对构建和完善中国转基因产品定量检测技术体系具有重要的实用价值和示范作用，可作为阈值管理的技术储备。

技术领域

本发明属于PCR荧光检测领域，更具体地，本发明涉及一种转基因棉花COT102品系的双重荧光定量PCR检测方法。

背景技术

转基因作物自1996年开始商业化规模种植，截至2018年底，全球累积种植面积达25亿hm²。至2018年底，全球共有26个国家和地区种植转基因作物，面积达1.917亿hm²，约是1996年的113倍；另有44个国家和地区进口转基因农产品。其中，转基因棉花种植面积为2490万hm²，占全球棉花总种植面积的76％。随着转基因作物在全球范围内的大规模种植和消费，越来越多的转基因作物用于食品或饲料的生产加工。由于公众对转基因产品潜在生物安全性和食用安全性的持续关注，为了保障消费者的知情权和选择权，越来越多的国家和地区开始实施转基因产品标识管理制度，并设定了标识阈值。目前，中国实行最严格的零阈值转基因产品强制标识制度。为了保障标识制度的顺利实施，建立转基因产品检测方法至关重要。

棉花是一种重要的经济作物，在食品和工业领域有诸多用途。棉籽油工业的主产品成品棉籽油是一种优质的食用植物油，含有大量人体必需的脂肪酸，同时又具有很好的起酥性，被誉为不含反式脂肪酸的天然起酥油；其副产品脱酚棉籽蛋白和饲用棉籽粕是重要的饲用蛋白原料；副产品棉籽壳是中国食用菌行业最主要的培养基原料。

目前，中国转基因植物种植面积位居世界第7位。中国一直重视转基因产品管理，目前仅有转基因棉花和番木瓜在中国批准商业化种植。同时，为了维护中国进境转基因农产品的安全性，中国农业转基因生物安全管理办公室会对进口转基因作物进行严格的安全性评估，通过后颁发农业转基因生物安全证书，而进口的转基因产品只能用作加工原料。随着中国棉籽(粕)进口量的逐年增加，口岸急需对各转基因品系进行检测监管，以防止农业转基因生物安全证书上未标明品系非法进入中国。同时，因目前国家标准和行业标准中均没有该品系的检测方法，因此针对COT102品系建立检测方法也为棉花及其来源产品转基因成分检测相关标准的完善提供技术支撑。

转基因棉花COT102品系是瑞士先正达公司研发的具有抗虫性状的转基因棉花品系，自2005年起陆续在美国、澳大利亚、新西兰等11个国家被批准用作食用或饲用原料，分别于2005、2017和2018年在美国、哥斯达黎加和澳大利亚被批准种植。该品系于2015年获得中国农业转基因生物安全证书，批准进口用作食用和饲用原料。目前针对该品系的检测方法仅有农业部2630号公告-9-2017。该标准规定了COT102品系的普通PCR和实时荧光PCR定性检测方法。

为了满足口岸检得快、检得准的要求，需开发针对转基因棉花COT102品系的高效率检测方法，尤其是能够实现定量和转基因组分含量比例计算的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种转基因棉花COT102品系的双重荧光定量PCR检测方法及其应用。针对现有技术缺乏针对转基因棉花COT102品系的高效率检测方法，本发明建立了转基因棉花COT102品系双重定量检测方法，实现该品系成分的定性、定量检测，提高检测效率，降低检测成本，提升通关效率，为进境转基因棉花及其制品的有效监管和标识制度的顺利实施提供有效的技术保障。