[发明专利]一类具有抗急性淋巴细胞白血病活性的NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束及其制备方法

权利要求书

1.一种具有抗急性淋巴细胞白血病活性的NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束在制备治疗癌细胞药物中的应用；其特征在于：所述癌细胞为白血病Nalm6细胞；所述具有抗急性淋巴细胞白血病活性的NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束的制备步骤包括：

步骤1）合成聚乙二醇对甲苯磺酸酯-聚乳酸胶束；步骤2）制备阿霉素胶束；步骤3）制备NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束；

其中，

所述步骤1）具体为：称取分子量为4000Da的聚乙二醇PEG 4.6g，加入10 mL二氯甲烷，并加入0.3 g三乙胺于冰水浴4℃搅拌30 min，使PEG 完全溶解；称取4-甲苯磺酰氯0.2g 及4-二甲氨基吡啶12.2mg，使用30mL 二氯甲烷溶解后，缓慢滴加到含PEG的二氯甲烷溶液中，滴加完后恢复至室温继续搅拌反应24 h；减压蒸馏除去部分溶剂，过滤除去反应生成的盐，滤液于冰乙醚沉淀两次，过滤收集产物，室温真空干燥即得白色粉末状的HO-PEG4000-OTs；然后称取HO-PEG-OTs 1g，D,L-丙交酯适量，质量为丙交酯的0.5 wt%的异辛酸亚锡溶于无水甲苯中，于130℃搅拌反应24 h反应结束以后，将反应产物溶于无水二氯甲烷中，于冰乙醚中沉淀两次，过滤收集产物，真空干燥即得产物聚乙二醇对甲苯磺酸酯-聚乳酸；

所述步骤2）具体为：称取步骤1）制得的聚乙二醇对甲苯磺酸酯-聚乳酸 20 mg，加入浓度为2 mg/mL阿霉素的丙酮溶液2 mL，于磁力搅拌器上避光搅拌；待聚乙二醇对甲苯磺酸酯-聚乳酸溶解完全后，缓慢滴加去离子水2 mL，搅拌均匀以后，35℃避光减压旋蒸1 h除去有机溶剂，得到澄清的阿霉素胶束溶液，最后使用0.22 μm的滤膜无菌过滤备用；

所述步骤3）具体为：取步骤2）制得的阿霉素胶束溶液，加入适量无菌过滤的pH = 7.4的PBS缓冲溶液，再加入NPM1结合蛋白，总体积为500 μL；混合均匀后，得到NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束。