[发明专利]一种单克隆抗体、其制备方法及用途

说明书

本发明公开了一种抗猪瘟病毒E2单克隆抗体、其制备方法及用途。所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区的CDR1的氨基酸序列如序列1所示；重链可变区的CDR2的氨基酸序列如序列2所示；重链可变区的CDR3的氨基酸序列如序列3所示；轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如序列4所示；轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如序列5所示；轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如序列6所示。本发明所述的单克隆抗体能特异性与猪瘟病毒E2蛋白结合，具有很好的抗原结合活性和一定的病毒中和活性，既可用于猪瘟的检测诊断又可以用于预防治疗，在开发猪瘟病毒新型诊断试剂和治疗药物中具有较好的生产应用前景。

技术领域

本发明属于免疫学、分子生物学领域，涉及一种抗猪瘟病毒E2的单克隆抗体、其制备方法及用途。

背景技术

猪瘟(Classical Swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(CSF virus,CSFV)感染家猪和野猪引起的一种急性、热性和高度接触传染的病毒性传染病，其特征为发病急、高热稽留和细小血管变性，引发全身泛发型小点出血，脾梗死。不同品种、性别、年龄的猪均易感，猪瘟是严重危害养猪业的重大传染病。猪瘟的病原体猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属，同属的成员还包括牛病毒性腹泻病毒、羊边界病病毒等。猪瘟病毒基因组是长度约12.3kb的单股正链RNA，包含两端的非编码区(untranslated region,UTR)和中间一个大的开放阅读框(open reading frame,ORF)，ORF编码一个大的多聚蛋白，该多聚蛋白经宿主细胞和病毒编码的蛋白酶水解加工产生具有功能的成熟蛋白，包括4种结构蛋白(Core、Erns、E1和E2)和8种非结构蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。其中，结构蛋白E2是最主要的免疫原性蛋白，诱导机体产生中和抗体并且能够保护猪抵抗猪瘟病毒强毒株的攻击，也是猪瘟基因工程疫苗研发的重要靶蛋白。

我国对猪瘟防控非常重视，2017年3月21日，农业农村部印发《国家猪瘟防治指导意见(2017-2020年)》，对猪场猪瘟的净化提出明确要求，截止2020年底，全国所有种猪场和部分区域达到猪瘟净化标准，并进一步扩大猪瘟净化区域范围。免疫接种是预防和控制猪瘟发生和流行的主要措施，猪瘟疫苗质量的好坏直接影响猪瘟的免疫效果。目前，市场化的猪瘟疫苗主要有三类：一是传统的猪瘟兔化弱毒活疫苗；二是基于猪瘟病毒主要保护性抗原E2的昆虫细胞-杆状病毒真核系统表达的亚单位疫苗，包括国内新疆天康的猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗(Rb-03株)、国外CSF E2和Pesti；三是以BVDV为骨架替换相应核苷酸区域为猪瘟病毒E2基因的重组活病毒载体疫苗CP7_E2alf，包括辉瑞CP7_E2alf pilot vaccine和硕腾Suvaxyn CSF Marker两个产品。

基于现有的商品化猪瘟疫苗种类和生产工艺，活病毒和/或活疫苗的抗原含量定量，即猪瘟疫苗的效力检验方法——半数荧光抗体感染剂量(50％fluorescent antibodyinfective does,FAID₅₀)是病毒学领域活病毒效价测定的经典方法，具有测定结果准确、方法稳定、操作简单等特点，可以通过猪瘟病毒E2单克隆抗体利用间接或直接免疫荧光的方法测定猪瘟病毒活病毒的含量。配套猪瘟E2亚单位疫苗和重组活病毒载体疫苗CP7_E2alf的血清学鉴别诊断需要同时具有抗猪瘟病毒E^rns和E2单克隆抗体，以区别出疫苗免疫动物，淘汰野毒感染动物。此外，以高特异性和亲和力为基础的猪瘟病毒E2单克隆抗体是阻断ELISA试剂盒的开发的核心。同时，野毒感染动物的治疗对抗猪瘟病毒E2单克隆抗体中和活性具有较高的要求。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种特异性结合猪瘟病毒E2的单克隆抗体，具有高亲和力和较好特异性的特点。

本发明的目的之二在于提供上述抗体的重链、轻链或其片段。

本发明的目的之三在于提供编码上述单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子或其片段，以及插入这些核酸分子以用于重组表达上述抗体的重组载体和重组细胞。